三维鱼类胶原支架的制备及其生物相容性研究.pdfVIP

　第５１卷　第１期 山　东　大　学　学　报　（理　学　版） ２０１６年１月　 　 　 　 　 　 　Ｖｏｌ．５１　 Ｎｏ．１　 　 　 　 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｊａｎ．２０１６　 　文章编号：１６７１９３５２（２０１６）０１００３６０７　　　ＤＯＩ：１０６０４０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１９３５２０２０１５２１９ 三维鱼类胶原支架的制备及其生物相容性研究 袁晓龙，徐彬，樊廷俊 （中国海洋大学海洋生命学院角膜组织工程重点实验室，山东 青岛２６６００３） 摘要：为了评价深海鱼类胶原蛋白用于制备组织工程角膜载体支架的可行性，首次利用鱼皮胶原蛋白进行了三维 胶原支架的制备及其生物相容性研究。用源于太平洋鳕鱼（Ｇａｄｕｓｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ）的纯化鱼皮胶原蛋白，经冷冻 干燥后选用１乙基３（３二甲基氨基丙基）碳二亚胺（ＥＤＣ）／Ｎ羟基丁二酰亚胺（ＮＨＳ）交联剂制备出三维胶原支 架，利用外观照相、光度计透光率、冰冻切片苏木紫－伊红（ＨＥ）染色及扫描电镜检测了其透明度和组织结构；在 接种ＤｉＩ（１，１′ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌ３，３，３′，３′ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｉｎｄｏｃａｒｂｏｃｙａｎｉｎｅｐｅｒｃｈｌｏｒａｔｅ）荧光标记的非转染人角膜基质（ＨＣＳ） 细胞后，利用冰冻切片ＨＥ染色和荧光观察鉴定了细胞的迁入及在支架内的分布情况，生物相容性评价采用ＭＴＴ （噻唑蓝）和免疫细胞荧光技术检测了支架对ＨＣＳ细胞活力和标志蛋白及功能蛋白表达的影响。结果显示，所制 备的三维胶原支架透明度极高，呈现出均匀的网格状结构，孔径大小为５０～１３０ ｍ；接种ＨＣＳ细胞并体外培养３ｄ μ 后，发现有大量细胞迁入支架内且分布较为均匀；支架抽提物对ＨＣＳ细胞活力没有任何不良影响；且迁入支架内 的细胞仍保持有其标志蛋白—波形蛋白，细胞连接形成蛋白—整联蛋白 １、Ｅ钙黏蛋白和间隙连接蛋白４３，膜运 β 输蛋白—钠钾泵，以及抗ＵＶ蛋白—乙醛脱氢酶的阳性表达。综上所述，利用太平洋鳕鱼皮胶原蛋白制备的三维 胶原支架具有良好的透明度与组织结构，不仅适合ＨＣＳ细胞的顺利迁入，而且对ＨＣＳ细胞具有良好的生物相容 性，有望作为载体支架用于组织工程角膜的体外构建研究。 关键词：鱼皮胶原蛋白；三维胶原支架；生物相容性；人基质角膜细胞；太平洋鳕鱼 中图分类号：Ｑ８１３　　　文献标志码：Ａ 引用格式：袁晓龙，徐彬，樊廷俊．三维鱼类胶原支架的制备及其生物相容性研究［Ｊ］．山东大学学报（理学版），２０１６，５１（１）：３６４２． Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎｏｆａｔｈｒｅｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｆｉｓｈｃｏｌｌａｇｅｎｓｃａｆｆｏｌｄａｎｄ ｉｔｓｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ＹＵＡＮＸｉａｏｌｏｎｇ，ＸＵＢｉｎ，ＦＡＮＴｉｎｇｊｕｎ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｒｎｅａｌＴｉｓｓｕｓｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭａｒｉｎｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ， ＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６００３，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｄｅｅｐｓｅａｆｉｓｈｃｏ