组胺HR1拮抗剂对变应性鼻炎IL12及DCs影响.docVIP

组胺HR1拮抗剂对变应性鼻炎IL12及DCs影响 　 作者：燕志强，章如新，余少卿，温武，吴革 【摘要】 目的： 通过观察组胺HR1拮抗剂干预后对变应性鼻炎（AR）大鼠血清中IL12，以及鼻黏膜中树突状细胞（DCs）的变化和影响, 并探讨其作用机制. 方法： 实验大鼠随机分为正常对照组，AR无干预组，AR HR1拮抗剂干预组，观察致敏以及组胺HR1拮抗剂干预后大鼠血清IL12含量及鼻黏膜中DCs数量的变化. 结果： 与正常对照组相比，AR无干预组血清IL12含量下降(Plt;0.01)，鼻黏膜中DCs数量则增加（Plt;0.01）；而AR HR1拮抗剂干预组经组胺HR1拮抗剂干预后，血清IL12含量回升(P=0.042)，鼻黏膜中DCs数量则下降（P=0.003）. 结论： AR时IL12含量减少以及DCs数量增加是AR发病的重要因素；组胺HR1拮抗剂可以抑制IL12，DCs的变化，是其在AR 治疗 中发挥作用的机制之一. 【关键词】 鼻炎，变应性，常年性；白细胞介素12；树突状细胞；组胺；受体；拮抗剂 0引言 组胺是变应性鼻炎（allergic rhinitis, AR）中主要的炎性介质. 随着分子生物学技术的 发展 ，组胺及其受体系统功能在AR等变态反应性疾病中的作用尤其对免疫系统的影响逐步引起重视. 组胺HR1拮抗剂是目前AR的主要一线治疗药物之一，对于控制AR的速发症状有良好的作用. 我们通过建立AR动物模型，并在给予组胺HR1拮抗剂干预后，观察大鼠血清IL12及鼻黏膜中树突状细胞（DCs）水平的变化，以探讨组胺HR1拮抗剂在AR中的作用机制，旨在为新的治疗策略提供理论依据. 毕业论文 1材料和方法 论文代写 1.1材料6 wk龄健康SD大鼠36只，雌雄各半，体质量160～200 g(第二军医大学长海 医院 动物实验中心). 静养1 wk后，按体质量随机分为正常对照组（NC组），AR无干预组（AR组）和AR H1拮抗剂干预组（HA组）. 所有动物实验操作均依照第二军医大学试验动物伦理委员会所规定的程序进行. S100一抗工作液（武汉博士德生物工程公司）；S100二抗试剂（即用型，Dako公司）. 论文代写 1.2方法 1.2.1模型制备及药物干预AR组和HA组大鼠参照 文献 ［1］的方法制作动物模型. NC组用生理盐水代替卵蛋白同步进行作为对照，10 g/L的卵蛋白生理盐水溶液鼻腔激发5 d，AR组和HA组动物均出现典型AR症状后，自第6日起，AR组继续10 g/L鸡卵蛋白溶液鼻腔激发，HA组则在10 g/L的卵蛋白溶液鼻腔激发前30 min给予氯雷他定混悬液灌胃（10 mg/kg），1次/d，累计9 d. 在鼻腔激发第14日鼻腔激发后1 h，开始收集标本，于最后1次激发后1 h，戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉（40 mg/kg），麻醉成功后采集实验用标本. 采血离心后取上清夜-20℃保存，然后取鼻黏膜一部分中性甲醛固定制备石蜡切片, 取部分切片HE染色常规病 理学 检查. 1.2.2标本检测 论文代写 1.2.2.1S100标记DCs细胞取中性甲醛固定的鼻黏膜,经脱水、透明、浸蜡、包埋后切片（片厚4 μm），然后烤片、脱蜡至水；PBS溶液洗涤（3 min×3）,用3 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶（室温20 min）；PBS溶液洗涤（3 min×3）,加适量0.01 mol/L(pH6.0) CBS溶液, 微波抗原修复（Ⅲ档，10 min×2）；顺序加S100一抗工作液1∶50，37℃，2 h；S100二抗工作液，37℃，30 min，PBS溶液洗涤（3 min×3）；最后行DAB显色（10 min）及苏木素复染,风干后中性树脂封片、烤片. S100免疫组化方法对DCs进行定位及相对定量研究,光学显微镜下记数5个高倍视野下平均每个高倍视野下S100阳性DCs细胞数. 1.2.2.2ABCELISA法测定血清中IL12含量将标准样品稀释液或待测样品100 μL依次加入微孔板孔中，其中前7孔为梯度稀释的样品稀释液，第8孔为空白对照，37℃放置120 min；洗涤液将反应板充分洗涤4次后,每孔中加入一抗体工作液100 μL,充分混匀后37℃静置60 min；再次用洗涤液充分洗涤反应板,反复4次；然后每孔加酶标抗体工作液100 μL，37℃静置60 min；同前洗涤反应板,每孔加底物工作液100 μL，37℃暗处反应5～10 min,出现黄色；每孔加1滴反应终止液混匀，颜色加深,492 nm处读取A值. 根据标准品稀释液测定结果并绘制标准曲线，根据标准曲线得出待测样品IL12浓度. 毕业