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肺炎链球菌检测方法及耐药探究 　 【关键词】 肺炎链球菌 检测方法 耐药研究 肺炎链球菌（Streptococcus Pneumoniae, SP）是儿科社区获得性感染的主要病原菌之一，它可引起儿童肺炎、脑膜炎、败血症、中耳炎、鼻窦炎。据WHO统计，全球每年约有超过120万人死于SP感染性疾病，其中大多数为2岁以下儿童［1］。早期有效的抗生素 治疗 可大大降低病死率，因此在临床工作中，应用快速、可靠的诊断技术检测SP感染，及早使用有效抗生素治疗显得尤为重要。近年来SP分离株对青霉素、头孢菌素、大环内酯类等多种抗菌药物耐药性在全球呈普遍上升趋势，SP耐药性的扩散及多重耐药菌株的出现成为临床上引起广泛关注的问题。 毕业论文 　 　1 SP检测方法 　　1.1 细菌培养 毕业论文 在临床实践中，对社区获得性肺炎患者通过应用常规的检测方法来确定病原菌仍存在许多障碍。从血液或胸腔积液培养分离获得SP仍然作为诊断的金标准，但它的阳性率仅10%～30%，甚至更低［2］。SP可定植于健康人群的鼻咽部及不充足或不恰当的痰标本使得基于痰培养的诊断标准饱受争议。此外，近1/3的患者进行病原学检测前已接受了抗生素治疗，这又降低了这种传统的检测手段的敏感性。若通过一些创伤性操作所获得的标本（如支气管灌洗液、肺穿刺获得的肺组织等）培养分离得到SP，则对病原学的诊断具有决定性意义。但是，由于创伤性技术需要专业人员进行操作并且有发生并发症的可能，因此不作为常规检查。虽然细菌培养所需要等待的时间较长（一般3～5 d），可能出现假阴性的结果（后者与标本量过少、已接受抗生素治疗或不理想的实验室条件均有关），但由于它是进行药敏试验及对流行株进行流行病学分析的基础，因此该技术在临床上仍有不可取代的地位。 　　1.2 免疫层析法 毕业论文 免疫层析法（ICT）是目前广泛用于SP诊断的快速方法。其检测的抗原为Cpolysaccharide抗原，是位于细菌细胞壁的C多糖，为SP各血清型所共有。由于ICT以尿样为检测对象，故又称为尿抗原检测法。 目前世界各国采用的是美国缅因州波特兰Binax公司生产的Binax NOWICT试剂盒。这是个非常简便的方法，只需15 min便可完成。该方法推荐使用的标本为标准的非浓缩尿样。将拭子条浸入尿样后置于检测卡中，再加入6滴试剂，15 min后出现1条色带的为阴性，2条色带的为阳性结果［3］。该试剂盒在临床诊断中具有较好的敏感性和特异性。据现有的报道敏感性为67%～92%（大多为75%～85%），特异性为90%～100%。该试剂盒同样可用于检测胸腔积液、脑脊液和支气管灌洗液。2002～2006年，西班牙的Jose M. Porcel等人采用该试剂盒对患者的胸水进行检测，发现敏感性为70.6%，特异性为93.3%。该方法较突出的优点是抗生素的使用并不影响检测结果的准确性，因此它不能用于评价抗生素治疗效果。在感染后1月内该试验均可阳性，这也造成了那些反复感染的病例被误诊的潜在可能性。特别在儿童中，由于SP的定植造成该试验非特异性阳性的问题已逐渐引起了关注。尽管该试验在SP感染的儿童中敏感性较高，但在尿抗原检测呈阳性的病例中仍有7%～15%的病例没有SP感染的临床证据［4］。 论文代写 ICT虽然在SP鼻咽携带者中存在假阳性结果，但由于ICT标本采集简便，不具创伤性，不受先前抗生素治疗干扰，具有较高的敏感性和特异性，15 min便可完成检测等优点，是快速诊断SP感染的简便方法。 毕业论文 　　1.3 聚合酶链式反应 聚合酶链式反应（PCR）敏感性高，特异性强，实时荧光定量PCR可对扩增产物进行可重复定量检测，在扩增的每个循环中至少收集一次荧光数据，对扩增产物进行实时监控，从而增加PCR的敏感性和特异性。2001～2004年，Alban Le Monnier等［5］对社区获得性肺炎患者的胸腔积液进行SP16S rDNA基因检测，发现该试验的敏感性为77%。在抗生素治疗初期，PCR不受其干扰，因此为早期诊断提供了较可靠的依据。然而，与ICT相比，PCR是一种复杂、耗时的检测方法，还未完全标准化，从而妨碍其成为SP临床诊断方法，主要作为实验研究的技术方法。 　 　2 耐药现状及耐药机制 　　2.1 β内酰胺类抗生素 论文代写 在上个世纪四、五十年代，当青霉素被应用于临床初期，SP对青霉素是相当敏感的。当时大部分菌株的青霉素MIC 0.015～0.03 mg/L。上世纪60年代，在澳大利亚和新几内亚，部分SP出现了对青霉素敏感性降低的现象，分离出对青霉素耐药的SP（penicillinresistant streptococcus pneumoniae, PR