高锰酸钾吸收曲线绘双缩脲法测定蛋白质蛋白质各种定量方.ppt

此实验共包括如下三个部分1. 第一部分：高锰酸钾吸收曲线绘制2. 第二部分：双缩脲法测定蛋白质3. 第三部分：蛋白质各种定量方法优缺点的比较 试剂使用规则 使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。 取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。 取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免污染瓶中的标准液体。 使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。 吸量管的使用 正确拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端。 移液管的使用：使用时应根据需量取的液体体积，选用能一次吸取即可的最小规格的移液管，以减少误差，如用5 ml移液管吸取4.5 ml蒸馏水，用0.5 ml的移液管吸取0.5 ml 0.0125%的高锰酸钾溶液。取液：用吸耳球吸取液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。 调刻度：吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 放液：吸量管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。吸量管应最后靠壁15秒。 吸量管的使用注意事项 吸量管上端标有“吹”字。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为“吹出式”，未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体，0.5ml 以下的都要吹。 吸量管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。 吸取血液、尿、组织样品、粘稠试剂或有颜色的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。如果吸取一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净，晾干备用。 一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等，先用自来水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自来水反复冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次，干燥备用。 容量分析仪器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自来水冲洗，待晾干后，再用铬酸洗液浸泡数小时，然后用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水淋洗2～3次，干燥备用。 比色杯：用毕立即用自来水反复冲洗。洗不净时，用盐酸或适当溶剂冲洗，再用自来水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙布(纸)擦拭。 上述所有玻璃器材洗净(以倒置后器壁不挂水珠为干净的标准)后，根据需要晾干或烘干。 分光光度法 物质的定量分析 标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光。测定时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称A-C曲线）。 标准管法 对个别样品进行测定，且A-C曲线线性良好直接比较测定结果。 A标 =K标c标b标 A测 =K测 c测 b测 c测 =A测 /A标 ×c标 分光光度计的基本构造 722分光光度计使用方法 接通电源，打开仪器电源开关，打开样品室盖，预热10min; 将空白液或对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用擦镜纸擦净外壁，放入样品室内, 空白液一般放于最外格，样品比色杯放入位置与试管位置对应; 调好波长; 调节按钮 开盖时，调 T 参数 调为 100 合上盖，调 A 参数 调为 0; 逐步拉出样品室拉杆（听到“咔”一声），读取吸光度值(A）; 读数完打开样品室盖，再将读数写入记录本。 第一部分 高锰酸钾吸收曲线的绘制 实验操作 取0.0125％高锰酸钾溶液0.5m1，加蒸馏水4.5ml，作为测定管;另用蒸馏水作为空白管； 用722型分光光度计测定不同波长的吸光度， 从450nm至500nm，每隔10nm； 502nm至538nm，每隔2nm； 540nm至560nm，每隔10nm； 在座标纸上以吸光度(A)为纵座标，波长(nm)为横座标，绘制吸收曲线，并指出最大吸收波长； 熟练722分光光度计的操作，在不进行测量时样品室盖应打开； 两人合作，一人操作分光光度计，一人记录数据。 第二部分 双缩脲法测定蛋白质含量 实验目的 了解和掌握双缩脲测定蛋白质浓度的原理和方法。 * 高锰酸钾吸收曲线绘制 双缩脲法测定蛋白质 蛋白质各种定量方法优缺点的比较 综合性设计性实验-1 玻璃器皿的清洗方法 光是一种电磁波，通常用频率和波长来描述光。 人的视觉所能感觉到的光称为可见光，波长范围在400～760nm，人的眼睛感觉不到的还有红外光（波长大于76