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茯苓等9种中药植物雌激素活性筛选实验探究 　 作者：帕丽达·阿不力孜 热娜·卡斯木 盛萍 丛媛媛， 服部征雄 【摘要】 　　目的对几种中药进行了植物雌激素的活性筛选。方法采用人乳腺癌细胞增殖法与酵母菌雌激素筛检实验法对9种中药进行了植物雌激素活性的研究。结果成功地建立了E-SCREEN法与Yeast Estrogen Screen实验法，此两种方法均可检测到1×10-13 mol/L的雌二醇。在这两种体外雌激素活性筛选实验条件下，当归、泽泻、川芎、牡丹皮、桂枝均有雌激素活性；而茯苓、桃仁则无雌激素样活性。结论E-SCREEN法敏感性高，并有快速、简便等优点，适用于大量化合物的初选。 【关键词】 人乳腺癌细胞增殖法 酵母菌雌激素筛检实验 雌激素活性 　　Abstract：ObjectiveTo evaluate the estrogenic activity of several kinds of Chinese herbal medicines. MethodsE-Screen and Yeast Estrogen Screen technology were used to study the estrogenic activity of nine Chinese herbal medicines. ResultsThe two methods detected estradiol at very low concentration as 1×10-13mol/L. It was found that Angelica acutiloba Kitagawa var.sugiyamae Hikono.,Alisma orientale Juzepczuk.,Cnidium officinale Makino.,Paeonia suffruticosa Andr.,Cinnamomum cassia Blume. had estrogenic effects, while Poria cocos wolf.and Prnus persica Batsch. lacked estrogenic effects at this assay.ConclusionThe E-SCREEN test is sensitive, rapid and easy to perform.It’s suitable for large-scale screening for estrogenicity of environmental chemicals. 　　Key words：E-SCREEN; Yeast Estrogen Screen; Estrogenic activity 　　植物雌激素（phytoestrogen，PE）根据分子结构的不同主要包括5类:黄酮类、木脂素类、香豆素类、二苯乙烯类、真菌等［1］。通过人乳腺癌细胞系MCF-7［2］检测雌激素活性的方法及酵母菌雌激素筛检试验法（Yeast Estrogen Screen）［3］对茯苓是否具有植物雌激素作用进行了研究。 　　MCF-7人乳腺癌细胞是最常用的检测雌激素样活性的细胞株，Soto最早从雌激素依赖的转移性乳腺癌分离并建株。在此后的研究中，发现该细胞含有雌激素受体，在雌激素作用下增殖，而且只对雌激素样物质产生效应，对其它非雌激素样化学物无效，Soto等把它检验雌激素的方法，并称为E-screen实验。酵母菌雌激素筛检实验目前最常见的是应用转染了hERcDNA和与编码β-半乳糖苷酶的LacZ基因相连的雌激素反应元件（ERE）的S.cerevisiac菌株。当经过E2或外源性雌激素处理后，YES系统中β-半乳糖苷酶活性显著增加。本研究中应用E-screen实验和酵母菌雌激素实验法对茯苓等中药进行了雌激素活性筛选研究。 　　1 材料 　　1.1 药物 当归Angelica acutiloba Kitagawa var.sugiyamae Hikono.(日本北海岛);川芎Cnidium officinale Makino.; 桂皮 Cinnamomum cassia Blume.; 桃仁 Prnus persica Batsch.;泽泻 Alisma orientale Juzepczuk.;茯苓Poria cocos wolf.白术Atractylodes japonica Koidzumi ex Kitamura.; 芍药Paeonia lactiflora Pallas.; 牡丹皮Paeonia suffruticosa Andr.（购于日本药局方）。各药材分别用10倍量水煮提两次，过滤，合并滤液并减压浓缩，真空干燥后配制成1mg/ml的水提液。 　　1.2 试剂