抗快速性心律失常活性化合物CPUY11018吸收机制的初步的分析研究.pdf

抗快速性心律失常活性化合物CPUY11018 吸收机制的初步研究 中文摘要 研究目的：探讨1-[4-(2,3-二氢-6-丙氧基)苯并吡喃]亚胺基-3-[3-(4- 甲基哌嗪-1-基) 丙基]-2,4-咪唑二酮 （以下称“CPUY11018 ”）在Caco-2 单层细胞吸收模型中转运 特点及在beagle 犬体内的药代动力学特征，估算其绝对生物利用度；分析 CPUY11018 体内、外吸收的相关性。 实验方法： 1. MTT 法测定CPUY11018 对Caco-2 细胞的毒性作用；2.建立准确 灵敏CPUY11018 的高效液相色谱-质谱法 （LC-MS ）检测方法；3.体外培养Caco-2 细胞，用Transwell 建立单层细胞吸收模型：观察药物浓度、时间、 pH 、转运方 向、代谢抑制剂、P-gp 抑制剂、MRP2 抑制剂等对CPUY11018 转运的影响，LC-MS 法检测药物浓度，计算表观渗透系数；4. Beagle 犬6 只，采用两交叉实验设计， 第一周期单剂量静脉滴注CPUY11018 ，第二周期单剂量灌胃CPUY11018, 给药剂 量均为14.8 mg·kg-1 ，LC-MS/MS 法测定beagle 犬血浆中药物浓度，利用DAS2.0 软件计算药代动力学参数，估算绝对生物利用度。 实验结果： 1.CPUY11018 在 6.25-200μmol ·L-1 范围内对 Caco-2 细胞无细胞毒 作用。2.测定CUPY11018 的LC-MS 法，操作简便，线性关系良好，回收率高， 批内、批间RSD 均小于15%，所有指标符合生物样品分析要求。3. Caco-2 细胞在 Transwell 中培养，TEER 值逐渐增大并趋于稳定，21 天后 TEER 值均大于 500Ω·cm-2 ，透视电镜下观察到 AP 侧整齐排列的微绒毛、细胞间具紧密连接和桥 粒。被动转运标志物普萘洛尔和旁路转运标志物荧光素钠表观渗透系数实测值与 文献值具有可比性，说明建立的单层细胞吸收模型具有较好的完整性和通透性。 CPUY11018 浓度对转运影响较大，高浓度（100μmol·L-1 ）的表观渗透系数约为中 浓度（50μmol·L-1 ）和低浓度（25μmol ·L-1 ）的两倍；碱性环境促进药物吸收；温 度对药物转运渗透系数无明显影响；P-gp 抑制剂和代谢抑制剂均可逆转 CPUY11018 由BL 到 AP 的外流现象；MRP2 抑制剂不影响药物的外流过程。4. Beagle 犬单剂量灌胃和静脉滴注14.8 mg·kg-1 CPUY11018 后，体内过程分别符合 二室和三室模型，其绝对生物利用度为71 % 。 2 实验结论： 1. 建立了HBSS 和血浆两种介质中灵敏、准确测定CPUY11018 的HPLC-MS 方法。 2. 建立了快速、可靠和简便的 Caco-2 细胞吸收转运模型，并成功用于 CPUY11018 的吸收机制研究。CPUY11018 体外吸收模型中较容易吸收，吸收方 式为被动扩散，碱性环境促进其吸收，在吸收过程中受到P-gp 等小肠外排蛋白的 外排作用。 3. CPUY11018 在Beagle 犬体内的吸收迅速，生物利用度较高，体内、外吸收 过程具有一定的相关性,具有良好开发前景。 关键词：CPUY11018 ；Caco-2 细胞；跨膜转运；生物利用度；吸收 3 Preliminary study on mechanism of absorption of CPUY11018，a ant-tachyarrhythmia agent Abstract Objective: To investigate the transport characteri