中国毛虾（Acetes+Chinensis）蛋白水解物中血管紧张素转移酶抑制肽的的分析研究.pdf

中国毛虾(Acetes Chinonsis)蛋白水解物中血管 紧张素转移酶抑制肽的研究 摘 要 本文首先用胰蛋白酶、$5317酸性蛋白酶、黄海黄杆菌低温碱性蛋 白酶、3942中性蛋白酶、2709碱性蛋白酶五种酶酶解中国毛虾蛋白， 通过分析水解产物的可溶性氮、总氮、对血管紧张素转移酶(ACE)的 抑制活性，选取黄海黄杆菌低温碱性酶和3942中性蛋白酶为制备ACE 抑制肽的最佳水解酶。分别做黄海黄杆菌低温碱性蛋白酶和3942中性 蛋白酶酶解中国毛虾蛋白的正交试验，对水解条件进行优化，得到ACE 抑制活性最高的黄海黄杆菌低温碱性蛋白酶酶解产物F4和中性蛋白酶 和F7组分味道鲜美，能够抵抗人体消化酶和ACE的水解，而保持较高 的ACE抑制活性，可以满足具有防治ACE引发的高血压作用的功能食 品的风味及稳定性要求。 考察体外具有ACE抑制活性的中国毛虾蛋白酶解产物F4和F7对肾 血管性高血压大鼠的急性降血压效果。两肾一夹型建立肾血管性高血压 大鼠模型，测定其血压和血浆中血管紧张素n(AngII)的含量变化。 结果显示F4及F7组分显著地降低了肾血管性高血压大鼠的动脉血压。 两种组分也降低了高血压大鼠血浆中的Angll水平，表明抑制AngII生 成是中国毛虾蛋白酶解产物急性降压作用的降压机制之一。 对具有体外和体内活性的中国毛虾蛋白酶解产物F4和F7进行分离 后，发现F4组分中抑制ACE的肽主要为分子量小于1000的肽。用 G．1 C．50进一步对分子量小于1000的组分 5和SP．Sephadex Sel：lhadex 8制备柱纯 进行分离纯化，取活性最好的峰，最后用反相高压液相cl 化得到单一组分FIA。通过氨基酸组成和氨基酸结构分析，确认FIA为 G一25、 新型的ACE抑制肽Pro—Arg—Tyr。先后采用层析柱Sephadex C．50对F7组分进行分离，选取ACE抑制活性最高的峰进 SP—Sephadex 一步用反相高压液相色谱C18制备柱进行纯化得到单一组分FI，经氨 基酸组成和氨基酸结构分析确定FI为新型的ACE抑制肽Ser—Pro。用 Ser．Pro抑制ACE的模式，结果显示这两种ACE抑制肽竞争性的抻制 ACE与底物的结合。 本文也对中国毛虾的发酵产品～虾酱中的ACE抑制剂进行了研 究。通过水提取、水提取后80％乙醇处理以及无水乙醇直接提取三种 酶具有一定的抵制能力，被ACE酶解30min后抑制ACE的活性上升。 关键词：中国毛虾(Acetes 制肽；急性降压作用；分离纯化；反相高压液相色谱 of l—converti Studyangiotensin i nhi ngenzymebitory fromAcetes peptides OhinensiS n protei Abstract 17acid alkaline Trypsin，$53 from protease，low—temperature protease neutral and2709a