的分析化学-吸光光度法.pptVIP

* * * * * * * * * 伊普西龙 * * * * * * * * * * * 有些显色反应，溶液颜色很快达到稳定状态，并在较长时间内保持不变;有些;有些。制作吸光度-时间曲线确定适宜时间. * 有机溶剂降低有色化合物的解离度，提高显色反应的灵敏度。如在Fe(SCN)3的溶液中加入丙酮颜色加深。还可能提高显色反应的速率，影响有色络合物的溶解度和组成等。 * 一般应该选择λmax为入射光波长。但如果λmax处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。 为了使测定结果有较高的灵敏度，应选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光，这称为“最大吸收原则”（maximum absorption）。选用这种波长的光进行分析，不仅灵敏度高，且能减少或消除由非单色光引起的对朗伯-比尔定律的偏离。 但是，在最大吸收波长处有其他吸光物质干扰测定时，则应根据具体情况选择入射光波长。 有干扰，选择不受干扰的次强吸收波长为测量波长 * 吸收池表面对入射光有反射和吸收作用；溶液的不均匀性所引起的散射；过量显色剂、其它试剂、溶剂等引起的吸收，这些因素影响待测组分透光度或吸光度的测量。采用参比溶液校正的方法消除或减小这些影响。在相同的吸收池中装入参比溶液(又称空白溶液)，调节仪器使透过参比池的吸光度为零(称为工作零点)。在此条件下测得的待测溶液的吸光度才真正反映其吸光强度。 * 邻近波长 * * * 2011.3 分析化学（2011) CYJ * （一）物理性因素 难以获得真正的纯单色光。 朗伯—比耳定律的前提条件之一是入射光为单色光。 分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。 2011.3 分析化学（2011) CYJ * ∵从严格意义上讲，L-B’s Law仅适于单色光： 设入射光由λ1、λ2二种波长的光组成，溶液中吸光微粒对光的吸收都符合Lambert-Beer‘s Law。 依光的加和性： I0 = I01+ I02 ， I = I1+ I2 2011.3 分析化学（2011) CYJ * 可见：（1）当ε1=ε2时，才有A=εb c； （2）∵ε=f（λ），∴在λ1、λ2处有ε1≠ε2，A与C的线性关系不能存在，且λ1与λ2差别越大，ε1与ε2差别越大，偏离越严重。 （3）在ε1与ε2差别较大（即λ1与λ2差别较大）时，C（或b）越大，偏离越严重。（用复合光测A产生负误差，导致曲线向C轴弯曲） 2011.3 分析化学（2011) CYJ * （4）实验证明：由于入射光不纯（非单色光）造成偏离情况一般较小，因为在λmax附近，ε变化较小，所以此时可获较好的线性关系，这也说明：①在λmax处测量灵敏度最高；②应选择λmax为入射波长（线性关系好，误差小）。 2011.3 分析化学（2011) CYJ * 3. 介质不均匀 散射、假吸收。 克服方法：避免溶液产生胶体或浑浊 2.非平行入射光 导致光束的平均光程b’大于吸收池厚度b，实际测得的吸光度大于理论值，产生正偏离。 入射光会因散射 而损失，导致T减小，实测的A偏高 2011.3 分析化学（2011) CYJ * (二) 化学性因素 朗伯-比耳定律假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用，实验证明，这种假定只有在稀溶液时才基本符合。当溶液浓度c 10-2mol·L-1时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。朗伯-比耳定律只适用于稀溶液。 溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时，使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。 (三) 工作曲线不过原点 存在系统误差：吸收池不完全一样；参比溶液选择不当等。 2011.3 分析化学（2011) CYJ * 2011.3 分析化学（2011) CYJ * 例，聚合引起的对吸光定律的偏离 单体： 2 ?max = 660 nm 二聚体： ?max = 610 nm A C ?max = 660 nm A ? 660 nm 610 nm 2011.3 分析化学（2011) CYJ * １．目视比色法 标准系列 未知样品 特点 利用自然光 比较吸收光的互补色光 准确度低（半定量） 不可分辨多组分 方法简便 10.7 吸光光度法应用 2011.3 分析化