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F-4600/7000 光谱校正步骤 天美科技有限公司 （安 平 编译） （一）激发单元（EX ）仪器函数的测量 1 ．1 罗丹明 B 的使用方法 由于激发单元分光器的波长特性等原因，必须采用罗丹明 B 作为光量子计来对激发 单元进行仪器的函数校正。仪器函数的读出存入自动进行，只需一次波长扫描即可。可以校 正的波长范围为 200～600nm。 参考图－1 将罗丹明 B 的注入到三角池中。平时请将罗丹明B 保存在暗处。 图－1 罗丹明 B 的加入方法 1．2 操作步骤 （1） 双击【Method 】图标进入分析条件画面。 （2 ） 在【General 】菜单中选择【Wavelength scan 】波长扫描方式。 （3 ） 进入【Instrument 】仪器菜单。 （4 ） 数据模式选择【Fluorescence 】荧光，光电倍增管高压设定为为400V ，扫描模式选 择【Excitation 】激发光谱。 （5 ） 展开工具栏中【Spectrophotometer】光度计菜单，选定【Zero 】,对仪器进行调零。 （6 ） 参考图－2 所示，将盛有罗丹明 B 的三角池放入样品室的池架里，安装滤光片支 架，并将红色滤光片插入其中；这时需要注意三角池和滤光片的安装方向（参考 图－3 ）。 盛有罗丹明 B 的三角池 滤光片支架 红色滤光片 图－2 安放罗丹明 B 和滤光片 1 图－3 三角池和滤光片的方向 备 注：当光电倍增管电压的设置有很大的变动不久（例如：700V→250V），由于检测器的特 性的原因，要想使测试数据达到稳定的状态则需要一定的时间。因此正确的调零是要等待仪 器稳定后再实施。 （7 ）展开工具栏中的【Utility 】实用菜单中的【Instrumental Response 】仪器响应菜单，实 施仪器的函数测量。图－4 是仪器函数测量的显示栏。从中选定 “ EX (200 to 600nm) ” 项（参考图－4 ①）。 图－4 （8 ）点击【Run 】钮（参考图－4 ② ）后，一个“请放置罗丹明 B 和红色滤光片”的信息 提示栏出现，然后将盛有罗丹明 B 的三角池和红色滤光片分别放置妥当后，点击【OK】钮 （参 考图－5 ③ ） 图－5 2 （9 ）发射波长被设定在640nm，激发波长 (198.6-601.4nm) 扫描开始。 测量条件如下所示被自动设定： Scan mode : ：Excitation （激发） Data mode ：Fluorescence （荧光） Ex slit ：5.0 nm Em slit ：20.0nm Scan speed ：60nm/min PTM voltage ：400V Response ：Auto （10）测量结束后测量条件返回以前的设置。至此、激发单元的函数测量、记忆完成。请将 罗丹明 B 和滤光片取出。 （二）发射单元（EM ）仪器函数的测量 2．1 概 述 由于发射侧单色器波长特性及检测器的波长特性等原因，需要求出发射单元的仪器函 数。用先前已经被校正过的激发单元分光器的发出的光作为基准，然后激发/发射两 波长做同步扫描，于是激发、发射两方的仪器函数被组合求出；再将这个函数值除以 先前得到的