埃博拉出血热相关标本采集包装运输技术指引-湖南疾病预防.docVIP

附件1 埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南 (Ebola hemorrhagic fever)是由埃博拉病毒(Ebola virus)引起的一种急性出血性传染病。人主要通过接触病人或感染动物的体液、分泌物和排泄物等而感染，临床表现主要为突起发热、出血和多脏器损害，病死率可高达50%-90%。本病潜伏期为2～21天，通常为8～10天。2014年，在几内亚、利比里亚和塞拉利昂等西非国家发生历史上最严重的埃博拉出血热暴发疫情。 一、生物安全防护 1、所有样本的采集或处理应遵守《医院感染管理规范》和《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关生物安全规定，在标准预防的基础上采用飞沫和接触隔离的预防措施。 2、采集样本时，应严格按照BSL-3级实验室规定做好个人防护。应穿戴医用防护服、可遮盖口鼻的医用防护口罩(N95)、戴双层防护手套、护目镜、、鞋套或 二、标本采集 （一）采集时间 一般发病后2周内，可在患者血标本中检测到病毒核酸和抗原，发病后3～10天的标本核酸和抗原的检出率高。在发病后数月内，可在特定分泌物中持续检出病毒。最早可从发病后2天的患者血清中检出特异性IgMIgM抗体可维持数月。发病后7-10天可检出Ig抗体，康复者Ig抗体可维持数年。发病10-14天以后的标本病毒特异性抗体的检出率高。因此，3天以后的血标本。 1. 采血场所除了病人常规护理的材料外，应备有手套、防护服和防护面具等，同时备有洗手的设施和装有消毒液的桶。 2.采集埃博拉出血热患者血样会给医护人员带来风险，应由经过生物安全防护培训的人员执行，采血时应2人在场。 .采用 4、留观病例和疑似病例应在发病3天后，采集静脉血2管，送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测。 5、确诊病例采集恢复期血标本，包括并不限于出院前标本2份，每份2管，采集时间间隔不少于48小时，送国家疾控中心病毒病所进行埃博拉病毒检测，用于指导病例管理。 四、标本包装、运输 （一）所有疑似埃博拉病毒相关感染性标本的运输应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《人间传染的病原微生物名录》等相关规定，采取A类包装，符合UN2814要求。按照三重包装系统包装：第一层包装为自封袋或50mL离心管；第二层包装为防水、防漏的安全壳容器；第三层为运输包装组成。防漏自封袋或离心管内放置在、防水防漏的第二层安全壳容器中，用吸水纸等填充物将自封袋或离心管固定好。安全壳容器和外包装须与IATA危险物品条例包装制度650相符合。 （三）样本运输之前，应按相关生物安全规定和样本接收单位生物安全管理部门联系，办理相关手续，运送日期确定后立即将运送的时间和运输方式通知接收单位。 五、样本保存和销毁 （一）埃博拉病毒阳性血标本，应根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关生物安全规定保存，实行“双人双锁”和取样“审批”管理。 （二）埃博拉病毒阴性血标本，应在排除埃博拉病毒感染后，转入其他血清库保存或销毁。 （三）所有感染性血清销毁时，均应在在生物安全柜内待其自然融化，60℃ 1小时灭活后，在生物安全柜内，打开样本管，置于有效消毒剂内浸泡，然后高压灭活。 （四）所有销毁样本均应在相应数据库清单内标明，并记录销毁的时间和操作人，阴性样本销毁记录应保存1年以，阳性样本的销毁记录应保存5年。 1目的 埃博拉病毒核酸的提取及PCR检测。 2 适用范围 适用于检测血标本中埃博拉病毒核酸。 3 实验前准备 核对被检样品，包括患者的姓名、编号及检测项目等。 4检测仪器设备和材料 实时定量核酸扩增检测仪，常规核酸扩增检测仪，RNA提取试剂盒，一步法RT-PCR扩增试剂盒，一步法实时定量RT-PCR扩增试剂盒等。 5实验步骤 5.1实验准备 5.1.1提取RNA要求在BSL-3实验室操作。 5.1.2进入实验场所之前，要事先准备好所需试剂样品。预约实验场所。 .2 RNA的提取 使用QIAamp Viral RNA Mini试剂盒提取血清标本中病毒RNA（使用其他试剂盒或方法提取病毒RNA的应参照相应试剂盒说明书或实验室操作手册）。 5.2.1吸取560μl包含载体RNA的AVL缓冲液至1.5ml的离心管中。 5.2.2向上述的液体中加入140μl样品，盖好盖后，轻轻的上下颠倒混匀10次，室温孵育10分钟，简单离心使离心管顶端液体落到底部。 5.2.3在样品中加入560μl 96～100％的乙醇，轻轻的上下颠倒混匀10次，再简单离心。 5.2.4小心将630μl液体加入QIAamp小柱中，盖好盖， 8000rpm/min离心,弃去收集管，将柱子置于一新的2ml收集管上。 5.2.5打开QIAamp小柱的盖子，重复步骤5.2.4，直至完成全部样品离心。 5.2.6打开盖子，向柱中加入500μl AW1 缓冲液，盖