实时荧光定量PC技术在食源性致病菌检测中的应用.pdf

中国食物与营养2014，20(8)：13—17 FoodandNutritioninChina 实时荧光定量PCR技术 在食源性致病菌检测中的应用 李敏，綦国红 (中国药科大学药学院，南京210009) 摘要：实时荧光定量PCR技术作为一种高效的微生物定量检测法，在食品工业中具有广泛的应用前景。本文 综述了实时荧光定量PCR技术检测原理，及其在食源性致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌0157：H7、沙门氏菌和 副溶血性弧菌检测中的应用。 关键词：实时荧光定量PCR-t支Y．-；食源性致病菌检测；微生物检测；定量检测 近年来，由食源性致病菌引起的食物中毒事件居高 2实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测 不下。传统的检测方法主要有平板培养显色法、酶联免 中的应用 疫吸附法(ELISA)、常规聚合酶链式反应(PCR) 法。1。。上述方法虽然具有特异性强、灵敏度高的优点， 目前，实时荧光定量PCR技术已初步应用到金黄 但无法进行实时测定、不利于致病菌定量测定。实时荧 色葡萄球菌(Staphylococcus 光定量PCR技术改进了常规聚合酶链式反应(PCR) coli (Eschenchia 法，实现了对致病菌的动态定量检测。 增李斯特菌(Listeria (pTbdo 1 实时荧光定量PCR技术概述 性致病菌的检测中。 实时荧光定量PCR技术基于荧光共振能量转移原 2．1 对金黄色葡萄球菌的检测 Resonance 理(]eluoresenee EnergyTransfor，FRET)，通 金黄色葡萄球菌可产生肠毒素导致食物中毒。传统 过将荧光基团加入到PCR反应体系，实时检测PCR指 的Baird—Parker平板和血平板结合法耗时长，灵敏度低， 数扩增期问的荧光信号强度变化。每个反应管内的荧光 易产生假阳性结果。目前主要以金黄色葡萄球菌的肠毒 信号达到设定阈值时经历的循环次数称为ct值(Cycle 素、耐热核酸酶基因作为靶基因，建立实时荧光定量 threshold)，以其拷贝数的对数作为横坐标，ct值作为 PCR法。 纵坐标建立标准曲线对未知模板定量分析，据此实现目 葛小萍等。51以SEA—SEE型肠毒素基因序列设计引 的致病菌的检测。2’…。 物，从46株金黄色葡萄球菌中检测出22株携带肠毒素 实时荧光定量PCR技术根据检测荧光信号的不同， 基因，阳性率达47．83％，SEA、SEB的检出率分别为 主要分为双链DNA特异性荧光染料和特异性荧光标记 31．82％和27．27％，可应用于金黄色葡萄球菌肠毒素基 探针。染料法利用染料嵌入DNA双链产生荧光信号指 因的分型检测中。唐吉思等两1针对肠毒素A基因建立了 示扩增产物水平，适用于非特异性的定量PCR检测；探 荧光定量PCR检测法，最低可检测出49．5