03生物信息传递(上)-2010-10-12.ppt

第三章 生物信息的传递（上） ——从DNA到RNA 一、基因的转录概述  转录：生物体以DNA为模板合成RNA的过程。 □ 参与转录的物质 原料: NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 模板:DNA 酶: RNA聚合酶 其它辅助因子 二、参与转录起始的关键酶与元件 （一） RNA聚合酶 □每个细胞中约有7 000个RNA聚合酶分子，时刻都 有约2 000-5 000个RNA聚合酶分子在执行转录。 □大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 RNA聚合酶（大肠杆菌）是一种多功能酶： ?识别和结合启动子； ?解开DNA双螺旋，恢复双螺旋； ?能与分离的DNA链以及转录产物RNA链结合； ?选择正确的底物NTP，按5→3方向催化合成RNA链； ?识别转录的终止信号，等。 ● 真核生物RNA聚合酶 （二） 启动子(promoter) 1、 原核生物启动子结构 （1）典型原核生物启动子的结构 -35 -10 转录起点 TTGACA 16-19bp TATAAT 5-9bp ① TATA区：酶的紧密结合位点（富含AT碱基，利于双链打开，并决定转录起始位置）。（-10区,Pribnow区） ②TTGACA区：提供了RNA聚合酶全酶识别的信号。 （-35区，与RNA聚合酶全酶结合有关，以及与启动子的强弱活性有关。） ③转录起始点：通常为嘌呤碱基（＞90%，CAT），但仅凭这个三联体碱基保守性还不足以构成专有信号。 ④-35区～-10区的间隔：在90%的启动子中， -35区和-10区之间的分隔距离在16～18 bp之间。个别例外的可以小于15bp或大于20bp。尽管间隔区的真实序列并不重要，但其距离大小对帮助几何对称的RNA聚合酶结合到一定间隔的两个DNA位点是很重要的。 （2）两类启动子突变： ◆下降突变（down mutation):降低其结构基因转录水平的启动子突变。如在细菌中，把pribnow区的TATAAT变成AATAAT就大大降低其结构基因的转录水平。 ◆上升突变（up mutation):提高其结构基因转录水平的启动子突变。如在乳糖操纵子中，将pribnow区从TATGTT变成TATATT，就会提高启动子的效率，提高乳糖操纵子基因的转录水平。 2、真核生物启动子 □真核有三种不同的启动子和有关的元件 □启动子Ⅱ最为复杂，它和原核的启动子有很多不同 □真核生物启动子的结构 （1）、核心启动子 ●定义：指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区。（Hogness区） （2）、上游启动子元件　　  定义：TATA区上游的保守序列，称为~。 ●包括CAAT盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等 （三）增强子 增强子（Enhancer）包括启动子上游或下游的一段DNA序列，可以增强启动子发动转录，提高转录效率。 其特点： 远距离效应 无方向性 有组织特异性，等。（P80） 首先被发现的增强子是SV40增强子。两个增强子位于基因组的两个串连的72bp重复中，约在转录起始点上游200bp处，每个72bp重复中有一个。缺失实验显示两个重复缺失一个并不产生什么影响，而如两个均缺失即将大大降低活体内的转录。有人发现，如果将β珠蛋白基因放在含有72bp重复的DNA分子中，它的转录作用在活体内将增高约200倍以上，甚至当此72bp顺序位于离转录起点上游1400bp或下游3000bp时仍有作用。各个基因中的增强子顺序差别较大，但有一个基本的核心顺序(core sequence)：AAAGGTGTGGGTTTGG （四） 转录起始复合物 ● 原核生物转录起始复合物 转录因子 转录复合体 TBP或TFIID TAFs TFIIA TFIIB TFIIF Pol II TFIIE RNA pol Ⅱ的转录起始 □真核生物RNA聚合酶不能直接识别基因的启动子区，需要一些被称为转录调控因子的辅助蛋白按特定顺序结合于启动子上，RNA聚合酶才能与之结合并形成复杂的转录起始复合物，以保证有效的起始转录。 三、转录的基本过程（以大肠杆菌为例） 1、模板识别 　　　RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程。 ▲转录起始不需要引物。 ▲转录起始位点的碱