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人源NOVA1蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定
生 物 工 程 学 报 李华玲 等/人源NOVA1 蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定 507
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn April 25, 2016, 32(4): 507−517
DOI: 10.13345/j.cjb.150345 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved
生物技术与方法
NOVA1
1,* 1,* 1 1 2
李华玲 ，吕贝 ，孔玲 ，陈欣虹 ，朱素娟
1 225001
2 225009
, , , . NOVA1 . , 2016, 32(4): 507–517.
Li HL, Lü B, Kong L, et al. Eukaryotic expression of human NOVA1 protein and identification of its anti-hypoxia activity.
Chin J Biotech, 2016, 32(4): 507–517.
摘 要: 构建人NOVA1 基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1 ，转染PC12 细胞后筛选最佳转染条件，进而
结合细胞免疫组织化学研究NOVA1 蛋白在 PC12 细胞中的表达分布，并探究其抗低氧活性。根据NCBI 数据
库NOVA1 基因序列设计上下游引物，以pCR4-TOPO-NOVA1 载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1
基因的全长cDNA 编码序列，限制性内切酶Sal Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后插入pCMV-Myc 真核表达载体，酶切及直
接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12 细胞，针对转染比例和转染时间进行优化，进而采用实时定量PCR
和Western blotting 检测NOVA1 蛋白的表达，最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1 蛋白在PC12 细胞中的
表达定位及其抗低氧活性。通过酶切和直接测序验证，成功构建了真核表达载体 pCMV-Myc-NOVA1 ；质粒和
Lipo2000 最佳转染比例为 1:2.5，最佳转染时间为72 h；最佳转染条件下NOVA1 基因和蛋白的表达水平显著
增加，转染pCMV-Myc-NOVA1 质粒后，NOVA1 蛋白主要分布于细胞核和细胞质；过表达NOVA1 的PC12 细
胞增殖活性明显增加。本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1 基因的真核表达载体，通过条件优化实现
了高效表达并测定过表达NOVA1 蛋白具有明显的抗低氧活性，不仅为深入揭示NOVA1 蛋白的作用机理提供
了重要参考，而且为NOVA1 蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑。
: 人源 NOVA1 蛋白，真核表达载体，转染，分布，抗低氧
Received: July 28, 2015; Accepted: October 22, 2015
Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos. 8167050872, 2015CXJ070).
Corresponding author: Sujuan Zhu. Tel: +86-514 E-mail: hlli@
*
These authors contributed equally to this study.
(Nos. 8167050872, 2015CXJ070)
2016-01-06 /kcms/detail/11.1998.Q1103.001.html
508 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech April 25, 2016 Vol.32 No.4
Eukaryoti
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