ν 电渗流.pptVIP

二、仪器流程与主要部件 process and main assembly * 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器； （可检测到：10-19～10-21 mol/L） 1.高压电源 * （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 3.缓冲液池 * 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置； 三、毛细管电泳的进样方式 injection method of HPCE * 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小； 1. 流体力学进样方式 （1）进样端加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样 2. 电动进样方式 * 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度大的进样量大； 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去； 特别适合黏度大的试样； 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入分离柱端口处。 第五章高效毛细管电泳分析法 一、毛细管区带电泳(CZE) capillary zone electrophoresis 二、毛细管凝胶电泳(CZE) capillary gel electrophoresis 三、胶束电动毛细管色谱 micelle electrokinetic capillary electrophoresis 四、毛细管等电聚焦(CIEF) capillary isoelectric focusing 五、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis * 第四节高效毛细管电泳分离模式 high performance capillary electrophoresis,HPCE separate types of HPCE 分离类型 * 八种分离类型，介绍常用的几种； 根据试样性质不同，采用不同的分离类型； 每种机理的选择性不同； 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE * 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用广的分离模式； 二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE * 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离，DAN排序的重要手段。 特点：抗对流性好，散热性好，分离度极高。 无胶筛分技术：采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备。 三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC * 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 * 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5.色谱与电泳分离模式的结合。 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； 四、毛细管等电聚