PCR扩增仪的性能指标.PPT

内容提要 1. PCR基因扩增仪的工作原理 PCR技术的原理及发展 PCR基因扩增仪的工作原理 2. PCR扩增仪的分类与结构 定性PCR扩增仪 实时荧光定量PCR扩增仪 3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 PCR扩增仪的性能指标 PCR扩增仪的操作规程 PCR扩增仪常见故障的排除 4. PCR扩增仪的应用 内容提要 3. PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 PCR扩增仪的性能指标 PCR扩增仪的操作规程 PCR扩增仪常见故障的排除 4. PCR扩增仪的应用 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 一、PCR技术的发展及原理 1971年，Kleppe等人首次在文章中准确、客观地阐述了PCR方法。 1985年，美国PE-Cetus公司的Kary Mullis等人发明PCR技术。 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物，重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 二、PCR基因扩增仪的工作原理 从PCR反应基本原理可以看出，PCR基因扩增仪工作关键是温度控制。 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 荧光实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）技术在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 金属板式实时定量PCR仪 可作为普通PCR仪使用 可带梯度功能 可容纳的样本量大，无需特殊耗材 温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 离心式实时定量PCR仪 温度均一性较好 使用的是同一个激发光源和检测器，随时检测旋转到跟前的样品，有效减少系统误差 可容纳样品量少，有的需用特殊毛细管作样品管，增加了使用成本，也不带梯度功能 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 各孔独立控温的定量PCR仪 不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，各孔独立控温，适合多指标快速检测。 SmartCyclerⅡ的软件允许一台仪器同时操作六个样品模块，既满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现任意梯度反应。 SmartCyclerⅡ上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。 第二节 PCR扩增仪的分类与结构 第三节 PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 一、PCR扩增仪的性能指标 第三节 PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 第三节 PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 （三）软件 简便的人性化设计最能满足其需求。新型的PCR仪很注重程序编写的简易性，易学易用，还具有实时信息显示、记忆存储多个程序、自动倒记时、自动断电保护等功能，很多还可以免费升级。 第三节 PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 （四）其他 多样化样品基座设计、热盖等都使PCR仪越来越人性化。 第三节 PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除 二、PCR扩增仪的操作规程 普通PCR扩增仪的操作非常简便，接通电源，仪器自检，设置温度程序或调出储存的程序运行即可。 定量PCR扩增仪的操作和普通PCR仪基本相同。 三、PCR扩增仪常见故障的排除 第四节 PCR扩增仪的应用 一、感染性疾病的分子诊断和研究 二、遗传性疾病的分子诊断和研究 三、恶性肿瘤的分子诊断和研究 四、PCR扩增仪在移植配型上的应用 五、PCR扩增仪在法医学上的应用 六、PCR扩增仪在分子生物学其他领域的应用 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 以不同温度的水浴锅串联成一个控温体系。 样品与水直接无缝接触，控温准确，温度均一性好，无边缘效应。 体积大，自动化程度不高，需人为干预，更换水浴锅时控温不稳定。 第一节 PCR基因扩增仪的工作原理 由压缩机自动控温，金属导热，控温较水浴锅方便，一台机器便可完成整个PCR流程。 压缩机故障率高