高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株抑制性消减杂交文库构建.docVIP

高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株抑制性消减杂交文库构建 　 作者：崔晓楠，唐建武，侯力，宋波，班丽英 【摘要】 应用抑制性消减杂交(suppression subtracted hybridization，SSH)技术，分别构建2个不同淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株的SSH文库，高转移文库以高转移能力细胞株Hca-F为检测子（tester），同源的低转移能力细胞株Hca-P为驱赶子（driver）；低转移文库则相反。随机筛选2个文库阳性克隆进行测序,并在GenBank数据库中进行同源性比较。成功构建高、低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞株SSH文库，高、低转移文库中分别包含995个及967个阳性克隆；其中，95％的阳性克隆含有300bp~1 000bp不等的插入片段；随机测序显示，文库中含有已知的基因、ESTs及与任何序列无同源性的新基因片段。 【关键词】 抑制性消减杂交技术 肝肿瘤 肿瘤转移为多基因事件，已克隆鉴定的转移相关基因远不能揭示作用在恶性肿瘤转移各个阶段的分子信息，因此高通量筛选肿瘤转移相关基因成为研究肿瘤转移机制的主要平台。Hca-P和Hca-F是一对来自同一小鼠肝癌细胞克隆的不同亚克隆，经615小鼠局部皮下注射后，特异地向引流淋巴结转移，Hca-P为低转移株，转移率lt;30%，Hca-F为高转移细胞株，转移率gt;80%[1]。两株细胞为同一亲本，具有基本相同的遗