62例喉癌患者中高危型HPV(16-18型)基因分析.docVIP

62例喉癌患者中高危型HPV(16/18型)基因分析 　 作者：彭郑坚，耿建祥，周伟，付雪东 【关键词】 喉鳞状细胞癌;HPV;高危型;原位杂交 高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virrus，HPV)是引起人类宫颈癌的主要原因，也是已知目前唯一明确引发人类恶性肿瘤诱因的病毒。根据HPV嗜鳞状上皮的特征，笔者采用原位杂交HPV基因检测技术对喉部鳞状细胞癌进行检测，分析高危型(16/18型)HPV表达与喉部鳞癌的关系，以探讨其临床意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 本组62例病例选取南京中医药大学第三附属医院病理科，安徽省马鞍山市第一人民医院病理科及安徽省滁州市第一人民医院病理科2004年4月—2008年10月间手术切除的喉癌标62例，均为男性病例。年龄43～82岁，平均65岁。所有病例术前均未行放疗和化疗，术后经病理证实。62例喉癌中，高分化癌24例，中分化癌17例，低分化癌21例;声门上型27例，声门型35例;临床Ⅰ期21例，Ⅱ期23例，Ⅲ期12例，Ⅳ期6例;有淋巴结转移21例，无颈淋巴结转移41例。 　　1.2 检测方法 62例喉癌及15例喉部正常的鳞状上皮组织(为对照标本)，标本均10%的福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片，常规HE染色外，行原位杂交HPV(16/18型)DNA检测。用地高辛记HPV(16/18型)探针，按照福建泰普生物科学有限公司试剂盒说明书进行标记，经过HPV病毒DNA变性，靶序列特异杂交，经信号放大、显色后，镜下观察结果。阳性信号在光镜下见喉鳞状细胞癌胞核呈棕褐色着色，胞浆呈小点状棕褐色着色(图1，2)，阴性对照，鳞状细胞核和浆不显色。 　　2 结果 　　HPV(16/18型)在62例喉鳞癌组织中呈核阳性表达率为72.6%(45/62)，其中高拷贝表达的15例，中拷贝表达的22例，低拷贝表达的8例，不表达的17例，胞浆表达率为95.2%(59/62)，其中高拷贝表达12例，中拷贝表达19例，低拷贝表达28例，不表达的3例，15例喉部正常鳞状上皮组织仅1例细胞核和1例细胞浆呈阳性表达。应用统计软件包SPSS 13.0处理，原位杂交HPV(16/18型)的阳性表达与喉癌的分型、分期、病理分化程度及颈淋巴转移均无相关性(Pgt;0.05)，喉鳞癌组织中(16/18型)的阳性表达与喉部正常鳞状上皮组织中的阳性表达差异有显著性(Plt;0.05)，提示HPV(16/18型)感染与喉鳞癌发生有相关性，差异有显著性(Plt;0.05)(图1，2)。 　　3 讨论 　　喉癌一般指喉鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)，它占全身癌肿的1.2%～1.6%，占男性所有肿瘤的2.2%，女性的0.4%，每年死亡率为4～10/10 000，几乎所有喉癌都是鳞状上皮癌，多数患者为40岁以上，通常发病高峰在55～65岁年龄段，也有较年轻患者的报道，大约96%的患者为男性。吸烟是危险因素之一，同时伴酗酒者危险性更高。喉癌发病有明显的地域性。声嘶是声带癌常见的早期症状。HPV在喉癌中的致癌作用，特别是HPV16型和18型，被认为是与喉癌发生密切相关的高危型，提示高危的型的感染是喉癌发病学中不容忽视的致病因子。喉癌患者发生第二种上呼吸道、上消化道或肺肿瘤的危险性增加。这可能与共同的致病因子HPV有关，尤其是高危型HPV在上述腔道中的感染有关[1～8]。 　　喉鳞癌的发生与多种危险因素有关，如性别、年龄、长期吸烟、酗酒等。最近的研究表明HPV感染可能是另一种独立的危险因素。HPV在喉鳞癌中的致癌作用，已是目前喉鳞癌病毒病因学研究的重要内容之一，尤其是高危型HPV感染被认为与喉鳞癌的发生、发展密切相关。喉鳞癌之所以大都发生于鳞状上皮覆盖的声门和会厌部，可能与这些部位缺乏纤毛运动，致癌物质(病毒、化学及物理致癌因子)易于在此停滞有关[9]。 　　分子遗传学特征：喉癌组织中有P53高表达。可能与P53突变相关，但在多数病例为野生型P53、P16缺失常见(约见于90%的病例)，可能为肿瘤早期的分子事件[8]。 　　乳头瘤病毒属乳头瘤病毒科，是一类特异感染人类上皮、黏膜的微小共价双链环状DNA病毒。1949年Straus等首先在电镜下从普通疣体浸出液中观察到HPV颗粒以来，至今已发现约200多种人乳头瘤病毒。其长约8.0kb(碱基对)，分子量为5×106，沉降系数40，在电镜下观察该病毒为球型、无包膜、表面有72个壳微粒，直径45～55nm[9]。 　　HPV可广泛分布于人和动物中，一般认为其高危型病毒致癌，也有低危型致癌的报道。目前有20多种致癌的高危型，其中13种高危型HPV较为常见，而16、18型HPV约占致癌型别的70%左右。自1976年有学者提出人乳头状瘤病毒(HPV)是致癌