CFSE检测马传染性贫血病毒疫苗免疫马T细胞增殖方法建立.docVIP

CFSE检测马传染性贫血病毒疫苗免疫马T细胞增殖方法建立 　作者：林跃智, 邓喜林, 沈楠, 吕晓玲, 赵立平 孔宪刚, 邵一鸣, 周建华 【摘要】 目的: 以流式细胞术(FCM)检测马传染性贫血病毒（EIAV）抗原特异性的T淋巴细胞增殖。方法: 将新鲜分离的马外周血单个核细胞（PBMC）进行CFSE 染色, 经纯化病毒体外刺激并培养5 d后, 进行T淋巴细胞亚型标记, 检测特异性增殖的CD4+和CD8+细胞比例。结果: 对马PBMC的染色浓度、 特异性刺激物的种类及反应时间等条件进行了优化。可对马外周血抗原特异性T淋巴细胞不同亚型的增殖水平进行定量评价 。结论: FCM检测方法为研究马传染性贫血病毒疫苗免疫保护机制提供了一个有效的手段; 该法也可以为其他病毒的免疫学研究提供借鉴。 【关键词】 T细胞增殖; CFSE; 马传染性贫血病毒 T淋巴细胞对抗原、 有丝分裂原(mitogen)和T淋巴细胞抗受体（antirecepter）抗体的反应能力是衡量机体免疫状况和淋巴细胞功能状态的重要指标。体外检测细胞分裂最常用的方法是MTT比色法和3HDNA掺入法, 这两种方法虽然能够提示细胞群体的分裂水平, 却不能反映单个细胞的分裂状况, 还存在放射性危害等局限性［1, 2］。随着流式细胞术（FCM）的发展, 多种荧光染料应用于细胞增殖的检测中, 其中以CFSE的应用