加味黄连阿胶汤对顺铂肾毒性大鼠TGFβ1表达影响.docVIP

加味黄连阿胶汤对顺铂肾毒性大鼠TGFβ1表达影响 　 作者：杨桂染 李淑贞 刘娜 杨艳梅 王晓宇 【摘要】 观察加味黄连阿胶汤对TGFβ1表达的影响。［方法］将SD大鼠随机分为5组，每组12只。除正常对照组外，其余各组给予DDP5mg/kg，正常对照组用等量生理盐水替代DDP尾静脉注射。加味黄连阿胶汤低剂量组和高剂量组分别给予加味黄连阿胶汤，连用8周，硫代硫酸钠治疗组注射顺铂的同时，给与硫代硫酸钠注射。实验结束时收集24ｈ尿液测尿蛋白、尿NAG的含量，股动脉采血测血肌酐、血尿素氮的水平，剖取肾脏组织行HE、免疫组织化学染色，检测TGFβ1在肾组织的表达情况，图像分析技术测定TGFβ1蛋白表达的平均吸光度值。［结果］模型组大鼠24h尿蛋白定量、NAG含量及血肌酐、血尿素氮均明显高于正常对照组。用药结束后，硫代硫酸钠治疗组及加味黄连阿胶汤各组24h尿蛋白定量、NAG含量及血肌酐、尿素氮均明显低于模型组，与正常对照组相比无显著性差异。与模型组相比，加味黄连阿胶汤各组及硫代硫酸钠治疗组TGFβ1的平均吸光度均有显著差异，且加味黄连阿胶汤各治疗组优于硫代硫酸钠治疗组。［结论］加味黄连阿胶汤能降低顺铂肾毒性大鼠24h Upro、NAG含量及血肌酐、血尿素氮水平，下调肾小管上皮细胞内TGFβ1的表达，减轻顺铂引起的肾小管和肾小管间质损伤。 【关键词】 黄连阿胶汤；顺铂；肾毒性；TGFβ1；肾间质纤维化 Fund project：Item of Hebei Provincial Scitech Research and Development Guiding Plan（NoDDP是治疗实体肿瘤最有效和最常用的药物之一，但DDP有严重肾毒性，且具有剂量依赖性。它可引起肾小球、肾小管形态功能的改变，尤其是近曲小管损伤最重，病理表现为肾小管上皮细胞水肿变性、坏死脱落，基底膜增厚，肾间质轻度纤维化［1］。近年来有关DDP肾毒性的研究很多，但关于TGFβ1在DDP肾毒性中的作用却鲜有报道。本实验旨在观察加味黄连阿胶汤对TGFβ1表达的影响，阐明其抗DDP肾毒性的部分作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　清洁级雄性SD大鼠60只，体重180～200g，由河北医科大学实验动物中心提供，合格证号：中科动管第005号。适应性饲养1周，随机分为5组，每组12只：正常对照组、模型组、硫代硫酸钠治疗组、加味黄连阿胶汤低剂量治疗组和加味黄连阿胶汤高剂量治疗组。 　　1.2 实验用药 　　加味黄连阿胶汤由黄连、黄芩、阿胶、鸡子黄、肉桂、女贞子等组成，按成年人一日剂量转换成大鼠用量。由本校附属医院制剂室按规定分别煎制成0.5g/ml，1.5g/ml，2个浓度的药汁，真空密封包装，每袋150ml，4℃冰箱保存备用。硫代硫酸钠由上海新亚药业有限公司生产，规格0.32g（相当于0.5gNa2S2O3.5H2O）。临用前，用灭菌注射用水溶解成10%的溶液后应用。顺铂由齐鲁制药股份有限公司生产，10mg/瓶。批号：805022cF，使用时用生理盐水稀释（1mg/ml）。 　　1.3 模型制备与给药 　　参照文献［2］及预实验造模。除正常对照组外，其余四组大鼠尾静脉注射DDP5mg/kg体重，正常对照组大鼠用等量生理盐水替代DDP尾静脉注射，1次/W，连续3W，硫代硫酸钠治疗组大鼠注射顺铂的同时注射10%硫代硫酸钠600mg/kg。第一次尾静脉注射后，加味黄连阿胶汤治疗组根据体重分别给以加味黄连阿胶汤0.5g/ml、1.5g/ml灌胃，正常对照组、模型组给以生理盐水灌胃，1次/d，连续8w，灌药体积均为1ml/100g体重。 　　1.4 观察指标 　　24h尿蛋白定量：磺基水杨酸比浊法，用ECOM2F6124型半自动生化分析仪（德国进口）检测；尿NAG含量测定：按南京建成生物工程研究所NAG测定试剂盒操作程序测定；血肌酐、尿素氮：用DimensionRxL全自动生化仪（美国进口）检测。肾组织TGFβ1：兔抗鼠多克隆抗体，试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供，采用免疫组化（SP法，DAB显色），工作浓度1∶100。其结果用HPIAS21000图像分析系统（同济医科大学制作，第二代产品）进行计算机图像分析，每组选10张切片，每张切片随机采集10个不重叠视野，胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性结果，每张切片取平均值，对各组测量结果的平均值进行半定量分析。 　　1.5 统计学处理 　　所有统计数据均采用SPASS12.0统计软件进行分析处理，计量资料用（x±s）表示，多组资料均数比较采用f检验，各组均数间的两两比较采用q检验。 　　2 结果 　　2.1 各组大鼠24h尿蛋白定量、NAG含量及血肌酐、血尿素氮的变化（见表1）表1