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VLDL-R及其检测方法 极低密度脂蛋白受体 概念 极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)是一种多功能、高亲和力的脂蛋白受体，属LDL受体超家族的一员，它负责结合富含apoE的脂蛋白(VLDL，β一VLDL，CM残粒等)，参与甘油三酯的代谢，是机体摄取血液中富含TG的脂蛋白的主要受体。 结构特点 VLDL-R基因定位于9p24,含19个外显子, 18个内含子,长约40 kb。除了一个编码LBR附加重复序列的附加外显子之外，VLDL-R的外显子-内含子的分布几乎和LDL受体基因相同。但LDL-R基因位于19号染色体而VLDL-R位于9号染色体上。完整的VLDL-R结构包含5个结构域:①配体结合结构域;②表皮生长因子前体同源结构域;③O-糖链结合结构域;④20个氨基酸组成的跨膜结构域;⑤胞内域 亚型： 根据由第16外显子编码的O-糖链结合结构域有无,将VLDL-R分为两种亚型 I型受体：主要分布于心肌，骨骼肌和脂肪组织等脂代谢旺盛的组织，可能主要参与脂质代谢。 Ⅱ型受体：主要分布于脑、肺、脾脏、肾脏等非肌组织，可能具有脂质代谢以外的其它生物学功能 最近有研究发现,通过选择性剪切,除了上述2种VLDLR还存在其他变异体。 Ⅲ型受体：缺少由第4个外显子编码的配体结合结构域 Ⅳ型受体：则同时缺少第4、16个外显子 功能 根据报道，VLDL-R参与脂蛋白代谢、动脉粥样硬化、代谢综合征、并可能涉及信号传导、血管生成以及肿瘤生长，但具体作用机制有待进一步阐明。 脂蛋白代谢 VLDLR结合含ApoE的TG脂蛋白能力很强。VLDLR通过识别apoE和LPL介导VLDL、β-VLDL的摄取。巨噬细胞的VLDLR不受细胞内TG和CE(胆固醇酯）含量的调节,即负反馈抑制,巨噬细胞可不断提取VLDL,导致细胞内TG和CE大量堆积,使其泡沫化。VLDL-R提升清除ILD的能力，使血浆IDL/LDL比值显著下降。可清除餐后甘油三酯。 动脉粥样硬化 在动脉粥样硬化区域，VLDL-R主要在巨噬细胞中表达，VLDL-R可能是巨噬细胞β-VLDL受体，而对泡沫细胞形成有相当的作用。 代谢综合征 VLDL-R敲除小鼠大块脂肪组织中度减少。VLDL-R缺乏会导致高卡路里饮食喂养的小鼠血浆甘油三酯升高。VLDL-R缺乏与血浆LPL活性下降同时出现可能与胰岛素缺乏的糖尿病人的严重高脂血症有关。这些数据显示，脂肪组织中VLDL-R表达抑制可能有助于糖尿病治疗。 信号传导 除了apoE LPL，VLDL-R还可以结合受体相关蛋白（RAP），血小板反应素-1等等 血管生成以及肿瘤生长 VLDL-R转染COS-7细胞，发现VLDL-R抑制细胞生长，是配体依赖性的。 学习本课题中几点不成熟的疑问 1、 富含TG的脂蛋白(TRL)是As的独立危险因子 ， VLDL-R被认为主要参与TG代谢。有些研究表示降低TG不能降低冠心病风险（？），VLDL-C独立于TG而增加冠心病风险。本研究能否证明VLDL-C是否独立于TG作用于动脉粥样硬化。在研究“VLDL-R及基因多态性和VLDL、VLDL-C对AS的影响”时TG以及其他AS危险因素是否应作为混杂因素予以考虑？ 2、VLDL-R的基因多态性可能通过影响VLDL-R的数量或功能而影响人群对VLDL和VLDL-C致动脉粥样硬化的易感性，我们的研究思路可否理解为：基因→VLDLR→VLDL、VLDL-C→AS? 但有些研究表明：① AS组与正常组VLDL-R的等位基因频率、基因型频率分布无显著性②影响VLDL-R因素包括VLDL、白细胞介素、低氧的生理情况等，VLDL或β-VLDL可能是导致VLDLR表达上调的始动因素，即VLDL→VLDL-R基因表达→VLDL-R→TRL摄入↑→AS. 也因此，我们分析VLDL-R与VLDL和β-VLDL以及VLDL-C水平的相关性，两者相关后如何确定VLDL-R与VLDL的因果关系？ 3、本研究测定血淋巴细胞的VLDL-R水平 ，相关研究表明：与动脉粥样硬化相关的细胞并不包括血淋巴细胞，动物实验中发现动脉斑块组织中VLDLR表达大幅升高，但并未说明血淋巴细胞中VLDL-R也升高。所以测定的VLDL-R水平是否具有代表性？ VLDL-R检测方法 RT-PCR （逆转录聚合酶链反应） 将RNA的反转录反应和PCR联合应用的一种技术。首先以RNA为模板，合成cRNA，再以cRNA为模板通过PCR反应来扩增目的基因。 RT-PCR是目前从组织或细胞中获取目的基因及对已知序列的RNA进行定性定量分析的最有效的方法之一。 WB（免疫印