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川芎嗪抗癫痫免疫学机制 　作者：柳朝阳 董淑欣 张涛 尹兴忠 孙鹏 王建杰 【摘要】 　　目的 研究川芎嗪抗癫痫作用的免疫学机制。方法 用腹腔注射戊四氮制作大鼠癫痫模型，致痫前后分组分别给予川芎嗪，观察大鼠出现癫痫发作的潜伏期及持续时间，采用放射免疫测定法检测川芎嗪对癫痫大鼠血清中白细胞介素2（IL2）、白细胞介素6（IL6）和肿瘤坏死因子α（TNFα）表达的影响。结果 与癫痫模型组相比，致痫前给予川芎嗪组大鼠癫痫发作潜伏期延长，持续时间缩短，差异显著(Plt;0.01)；致痫后给予川芎嗪组，上述指标无显著差异(Pgt;0.05)。与癫痫模型组相比，致痫前给予川芎嗪组IL2、IL6和TNFα水平明显降低，差异显著(Plt;0.01)；致痫后给予川芎嗪组，上述指标无显著差异(Pgt;0.05)。结论 川芎嗪抑制癫痫作用机制与降低IL2、IL6和TNFα对免疫神经网络的调节有关。 【关键词】 川芎嗪；癫痫；白细胞介素2、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α；戊四氮 　　川芎嗪(ligustrazine)为中药川芎的有效成分，化学结构为四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine， TMP)，进入机体后，能有效透过血脑屏障，广泛分布在脑干、海马、纹状体、小脑和大脑皮层等部位。TMP扩张血管的机制已有许多研究〔1〕，但对癫痫的作用及机制研究较少。本研究探讨川芎嗪是否通过降低白细胞介素(IL)2、IL6和肿瘤坏死因子α(TNFα)表达水平来影响神经系统的兴奋性，为川芎嗪治疗癫痫提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品及试剂 　　川芎嗪注射液40 mg/2 ml(北京第四制药有限公司生产，批，TNFα、IL2和IL6放射免疫检测试剂盒(北京科美东雅生物技术开发有限公司生产)。 　　1.2 动物分组及模型制备 　　采用健康雄性Wistar大鼠40只(佳木斯大学动物中心提供)，体重200～250 g。随机分4组，每组10只。正常对照组：腹腔注射0.9%氯化钠注射液2 ml；癫痫模型组：4 mg/kg腹腔注射戊四氮；致痫前给予川芎嗪组：40 mg/ kg腹腔注射川芎嗪〔2〕，30 min后，4 mg/kg腹腔注射戊四氮；致痫后给予川芎嗪组：4 mg/kg腹腔注射戊四氮，45 min后，40 mg/kg腹腔注射川芎嗪。 　　1.3 行为学表现 　　根据Diehl〔3〕的评估标准，将大鼠的癫痫发作程度分为0～Ⅴ级。0级：无任何反应；I级：面部抽搐及咀嚼；Ⅱ级：点头或甩尾；Ⅲ级：一个肢体抽动；Ⅳ级：多个肢体抽动或强直；Ⅴ级：前肢及全身阵挛，失去平衡，跌倒。 　　1.4 放射免疫法测定血清中TNFα、IL2和IL6的含量 　　大鼠颈静脉取2 ml血液，离心沉淀，-20℃保存。测定前置室温复融，混匀，4℃ 3 000 r/min离心5 min，取上清液按试剂盒说明书方法测定。 　　1.5 统计学处理 　　所有实验数据均用x±s表示，采用SPSS 11.0统计软件进行方差分析和t检验。 　　　2 结果 　　2.1 行为学观察 　　潜伏期是从注入戊四氮开始到出现Ⅰ级发作时间，持续时间是指从出现Ⅰ级发作到不再发作的时间，见表1。在4组大鼠中，对照组无癫痫发作，癫痫组大鼠多为Ⅲ～Ⅴ级发作；致痫前给予川芎嗪组大鼠多为Ⅰ～Ⅲ级发作；致痫后给予川芎嗪组大鼠多为Ⅲ～Ⅴ级发作。表1 各组大鼠癫痫发作潜伏期和持续时间比较(略) 　　 　　2.2 TNFα、IL2、IL6和IL8的放射免疫检测 实验组血清中TNFα、IL2和IL6含量均明显高于正常对照组(均Plt;0.01），见表2。表2 4组血清中TNFα、IL2和IL6的含量(略) 　　3 讨论 　　目前认为癫痫的发病过程与神经免疫调节网络失衡密切相关。在这个调节网络中，神经系统调节免疫系统的功能主要通过产生多种神经肽和神经递质，而免疫系统调节神经系统的功能主要是通过产生免疫细胞因子(cytokine，CK)〔4〕。 　　NMDA（N甲基D天门冬氨酸）受体是一种兴奋性神经递质的主要受体，细胞内Ca2+浓度升高或NMDA受体活性升高或数量增加，是神经兴奋性增高的一个重要标志，同时也是癫痫发病的重要基础〔2〕。IL2是由活化的T细胞产生的重要细胞因子，该因子能够促进大脑皮层神经元细胞钙内流、升高细胞内游离Ca2+浓度和上调神经元NMDA受体数量，起到兴奋性神经递质的作用〔5〕。 　　Glu（谷氨酸）是一种中枢神经系统内含量最高的兴奋性神经递质。Glu作用于细胞膜上NMDA受体，使受体依赖性Ca2+通道开放，Ca2+内流，细胞内Ca2+增加可以激活磷脂酶，使质膜内的磷脂酰肌醇（PIP2）水解，产生胞内第