液相色谱-原子荧光联用测定海带与紫菜中的砷形态.docVIP

液相色谱-原子荧光联用测定海带和紫菜中的砷形态 薛慧 （北京海光仪器公司） 摘要：不同价态或形态的砷具有不同的毒性和生物可利用性，传统的仅以元素总量为依据的研究方法已不能满足现代科学发展的需要[1]，为建立液相色谱-原子荧光联用技术测定海产品中的砷的方法[2]，本文研究了前处理方法（提取法和消解法）、酸介质与酸度等因素对测定的影响，在最佳工艺条件下，砷的四种常见组分的最小检出量分别为：三价砷：0.20ng，二甲基砷：0.25ng，一甲基砷：0.32ng，五价砷：0.57ng，方法的回收率为80%～110%，精密度（RSD）分别为2.2%，2.2%，2.5%，2.8%，适用于海产品中砷的测定。 关键词：液相色谱-原子荧光联用，海产品，三价砷，二甲基砷，一甲基砷，五价砷 1. 前言 越来越多的研究表明，元素的毒性、生物可利用性、迁移性和再迁移性与元素的化学形态息息相关[3]，而元素的化学形态与食品安全又存在着千丝万缕的联系。近年来，食品的安全问题倍受人们的关注。砷是食品中的有害元素，而不同价态或形态的砷具有不同的毒性和生物可利用性，它不易被微生物降解，一定条件下可转化为毒性很强的砷有机化合物，且有致癌作用，因此，不同价态或形态的砷在食品中含量的测定已经成为食品监测的必测项目。自然界常见的砷形态有六种，即亚砷酸盐As（Ⅲ）、砷酸盐As（Ⅴ）、一甲基胂酸（MMA），二甲基胂酸（DMA）、砷甜菜碱（AsB）和砷胆碱（AsC），而前两种无价砷毒性最大[4]，本实验选取的样品是海带和紫菜。 2 试验部分 2.1原理 在液相高压泵的作用下，利用阴离子交换色谱住可以将已处理的样品溶液中各种组分分离开来，然后，各组分进入检测系统，在酸性介质中，处理后的样品中所含砷的不同价态或形态与硼氢化钾反应在氢化物发生系统中生成砷的氢化物，由载气带入原子化器中，氢气和氩气在特制点火装置的作用下形成氩氢火焰，使待测元素原子化。砷空心阴极灯发射的特征谱线通过聚焦，激发氩氢焰中的砷原子，基态原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，如果以辐射的形式释放能量，就会发射出特征波长的荧光，其荧光强度与砷的含量成正比，与标准系列比较定量。 2.2 仪器 LC-AFS-9800液相色谱-原子荧光联用仪（北京海光仪器公司），编码砷空心阴极灯，可编程断续流动进样装置。 所用玻璃仪器，均需用（1+1）硝酸浸泡过夜，再用去离子水冲洗干净，晾干，备用； 2.3 试剂与试剂配制 氢氧化钠（NaOH）：分析纯；硼氢化钾（KBH4）：分析纯； 磷酸氢二钠（Na2HPO4）：分析纯；磷酸二氢钾（KH2PO4）：分析纯； 盐酸（HCl）：优级纯；硝酸（HNO3）：，优级纯；高氯酸（HClO4，）：优级纯； 硼氢化钾（20 g/L）-氢氧化钠混合溶液（5 g/L）：称取硼氢化钾14.0 g，氢氧化钠2.5 g，用去离子水溶解，定容至500 mL，混匀。（也可称取10 g硼氢化钠代替14 g硼氢化钾，溶于5 g/L的氢氧化钠溶液中。） 洗脱液（Na2HPO4-KH2PO4）：称取0.8954 gNa2HPO4和3.026 g KH2PO4，溶解于500 mL高纯蒸馏水中，PH大约5.92，经过滤、超声脱气后备用。 盐酸（5%，V/V）：量取25 mL盐酸，缓缓倒入500 mL水中，混匀备用； 本试验用水均为高纯蒸馏水； 三价砷、二甲基砷、一甲基砷、五价砷标准溶液：购买自国家标准物质研究中心； 砷标准储备溶液（1000 μg/L）：将1000 μg/mL砷标准溶液用高纯蒸馏水逐级稀释至1000 μg/L。 2.4 样品预处理 2.4.1 湿法消解 称取样品粉末0.5~1.0 g，置于50~100 mL锥形瓶中，同时做两份试剂空白。加8 mL浓硝酸与2 mL高氯酸的混合酸，摇匀后放置过夜。置于电热板上加热消解，若消解液处理至1 mL左右时仍有未分解物质或色泽变深，取下放冷，补加硝酸5~10 mL，再消解至2 mL左右观察，如此反复两三次，注意避免炭化，继续加热至消解完全后（消解液颜色无色或淡黄色），持续蒸发至高氯酸的白烟散尽，剩约0.5 mL，冷却，用水将内溶物转入50 mL容量瓶或比色管中，用高纯水定容并混匀，使得酸度约为1%，备测。 2.4.2 水浴提取 称取样品粉末0.5~1.0 g，置于50 mL带盖的塑料瓶中，同时做两份试剂空白。加入1%的硝酸溶液10 mL，置于沸水浴中，每30 min震摇1 min，加热3 h，然后冷却至室温，在离心机中以800 0r/min的速率离心15 min，取上层清液，经0.45 μm的滤膜过滤后待测。 2.5 校准曲线的制备 单标配制： 亚砷酸盐As（Ⅲ）：以砷计浓度75.7 μg/mL； 用移液枪取20 μL上述标准液，用高纯水定容至1.5 mL，浓度为1000