薄层色谱法 PPT课件.ppt

2 薄层色谱系统 薄层板 未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性。 黏结剂 无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表示。无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。 3 薄层色谱参数 保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。， 4 流动相与展开体系 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素： 5 薄层扫描 原理 薄层定量方法可分为 直接法——测定照射光照射色谱后，因被测物斑点的存在引起的透射光和反射光的变化。并通过随行标准比较待测斑点的量。 间接法——将部分照射光的能量转换成较长波长的荧光，即荧光测量。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 6 定性、定量方法 定性方法 利用保留值 测定Rf值 测定相对Rf值，即Rx值。 利用二维色谱（改变色谱条件，比较Rf值是否一致） 7 应用 药物鉴别——采用标准对照法 杂质检查 杂质对照品法 高低浓度法 药物标准品对照法 不允许有杂质斑点存在，即以方法灵敏度来控制杂质量。 含量测定——主要用于中药有效成分的分析 大黄药材 紫外光灯（254nm）检视 氨熏检视 溶剂的选择性 指溶剂引起两种溶质位移差别的能力，即分离度。 R=1/4（? -1） [?k /（ ?k +1）] ? 分离因子?= k1/k2，k为k1和k2的平均值 由上式可见，R取决于三个因子： 理论塔片n主要是吸附剂性质的函数 ?k 反映了两种溶质的平均迁移速度，其由流动相溶剂强度?? 决定 ?取决于吸附剂和流动相的组成 溶剂优化规则： 增加溶剂强度，使Rf值增大，但也可能降低分离能力。 流动相中较强组分的体积比小于5%或大于50%，选择性最大，此时最有利于溶质与流动相组分的选择性相互作用。 用乙醚或甲醇代替流动相中的一种较强组分，由于形成氢键可改善选择性。 若出现斑点拖尾，可向流动相中加少量水，或降低薄层活性，有利于改善分离。 也可采用两种强溶剂与一种弱溶剂组成的三元混合流动相，此时，溶剂强度由弱溶剂控制，而溶剂选择性则由两强溶剂控制。 斑点的扩散与形状 在TLC中斑点的移动与扩散是二维的，因为斑点在展开方向和与之垂直方向上的扩散速度是不相等的，展开剂的移动速度也是不等的，在单位体积或单位质量薄层内所含的溶剂量越接近溶剂前沿减少得越明显，直至溶剂前沿时为零，这一现象称为“溶剂的体积梯度”，在各种展开形式中均存在。当然，对于这一问题实际上只是在定量斑点浓度时才需要考虑。 同时一种成分的色谱行为会受到混合物中其他成分的影响，这种影响的大小取决于混合成分的种类、浓度、以及斑点间的距离等。这种影响一般使分配系数变小。如两个相邻斑点中后面的一个展开速度较其单独展开时为大。 固定相的活度及其调节 在其他因素一定时，活度增加，Rf值减少，反之亦然。可通过预吸附溶剂分子，调节其表面活性。例如可将活化薄层板放在相对湿度恒定的空间里来达到调节活度的目的。 实际工作中常常使固定相预吸附一定量单一或混合溶剂蒸气，预吸附量越大，溶剂前沿运动速度越快，物质斑点的Rf值越小。 预吸附还可能影响Rf在0.6-1.0之间的斑点的分离。 在层析过程中发生的边缘效应就是由于这种因素引起的。尤其是使用混合溶剂时，极性较弱和沸点较低的溶剂，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展开剂中极性溶剂的比例增大，Rf相对增大。同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的Rf值小，即边缘效应，若在展开前先将展开槽与薄层板用展开剂蒸气饱和后再展开，边缘效应可消失。采用双槽层析缸尤为有利。 预吸附中 展开中 展开过程中用不同于展开剂的溶剂调节槽内气氛 一强度为I的光照射薄层时，被照射的一面为“近表面”，另一面为“远表面”。 近表面 远表面 光（I） 镜反射或表面反射Is(表面平滑) 漫反射 (表面粗糙) 入射强度I0 出射强度(IT ) IT / I0为薄层透射率AT 返回光强(IR ) IR / I0为介 质的漫反射率AR I0 -（ IR + IT ）=差为被介质吸收并转换为热的光强 光学系统 薄层色谱扫描仪光学系统有三种 单光束单波长——受光源稳定性和薄层质量影响严重。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用，选择的两个波长应接近些。 双光束单波长——可补偿光源不稳引起的误差，但对板层不均匀无作用。 光 单色器 检测器 光 波长1 波长2 检测器