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实验一凝集反应
医学免疫学实验讲义
实验一 凝集反应
在一定浓度的电解质溶液中,颗粒性抗原与相应抗体结合后,出现肉眼可见的凝集块,称为凝集反应(agglutination reaction)。凝集反应是一种定性的检测方法,即根据凝集现象的出现与否判定结果阳性或阴性;也可以进行半定量检测,即将标本作一系列倍比稀释后进行反应,出现阳性反应的最高稀释度作为滴度(或效价)来判断结果的强弱。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。由于凝集反应方法简便,目前在临床检验中仍被广泛应用。
一、直接凝集反应
细菌、细胞等颗粒性抗原,在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集,称为直接凝集反应(direct agglutination reaction)。凝集反应中的抗原又称为凝集原(agglutinogen),抗体称为凝集素(agglutinin)。常用的直接凝集试验有玻片法和试管法两种。
(一)玻片凝集试验——ABO 血型鉴定
【原理】
玻片凝集试验为定性试验,一般用已知抗体作为诊断血清,与受检颗粒性抗原如菌液或红细胞,各加一滴在玻片上,混匀,数分钟后即可用肉眼观察凝集结果,出现凝集颗粒的为阳性。此法简便,快速,适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型,也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
【材料】
标准血清(抗体):抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。
盛有1ml生理盐水的一次性试管1支。
一次性采血针1枚、白瓷板或玻片1块、一次性毛细吸管1支、75%酒精棉球和灭菌干棉球。
【方法】
用酒精棉球消毒被检者的耳垂或手指尖端,以采血针刺破皮肤,稍加挤压,使血液流出,滴1~2滴血液于含有生理盐水的试管内,摇匀,使成为血球悬液。用灭菌干棉球止血。
取白瓷板1块,将抗A、抗B分型试剂分别滴加1滴于白瓷板的两个圆孔内。
用毛细吸管吸取血球悬液,在白瓷板的两个圆孔内各加1滴。
4. 将白瓷板前后左右不停地摇动,使其充分混匀,5~10min后观察血球有无凝集发生。如有凝集,可见红细胞凝集成块;无凝集,红细胞呈均匀分散(图1)。
5. 记录受检者红细胞凝集情况,根据ABO血型鉴定表,判断受检者的血型。
表1-1 A B O血型鉴定表
抗A分型试剂 抗B分型试剂 血型 + - A - + B + + AB - - O
红细胞不凝集 红细胞凝集
图1 红细胞凝集判断示意图
【注意事项】
采血前应对采血部位进行消毒。
采血针必须一人一针,禁止混用,严防交叉感染。
3. 本法也可将血液直接滴在白瓷板或玻片上,而不必用生理盐水稀释,其结果不变。
(二) 试管凝集试验
【原理】
试管凝集试验是一种半定量的试验方法,常用于血清中抗体的测定,其浓度常以效价表示。即将待检血清在试管内作一系列倍比稀释,然后加入相应的颗粒性抗原,使其在试管内发生直接凝集,以出现明显凝集(++)的血清最高稀释度为其效价(亦称为滴度)。临床上常用的试管凝集试验有:肥达试验(Widal test)和外斐试验(Weil-Felix test)。
【材料】
诊断血清:1∶10稀释的伤寒杆菌“O”及“H”诊断血清。
抗原:伤寒杆菌“O”菌液(菌体抗原),伤寒杆菌“H”菌液(鞭毛抗原)。
生理盐水、小试管、吸管、试管架、水浴箱等。
【方法】
取清洁小试管16支,分两排列于试管架上,每排8支,依次编号,每管内加生理盐水0.5 ml。
用1ml洁净吸管吸取伤寒杆菌“O”诊断血清0.5ml加入第一排的第1管内,于管内上下吹吸3次,使血清与生理盐水充分混匀,吸出0.5ml加于第2管,同法混匀,吸取0.5ml加于第3管,依次稀释至第7管,从第7管吸出0.5ml弃去。第8管为生理盐水对照。稀释方法如图2所示。
图 2 血清倍比稀释法
同法稀释第2排的伤寒杆菌“H”诊断血清。
用1ml洁净吸管吸取伤寒杆菌“O”菌液,从第1排的第8管起依次向前在各管内加入0.5ml(表1-2)。
另取1支1ml吸管,同法于第2排各管中加入伤寒杆菌“H”菌液0.5ml。
将各试管振荡混匀, 放入37℃水浴箱中2~4小时,初步观察结果后,置4℃冰箱过夜,次日再行观察。
【结果】
先观察第8管对照(图3),管底沉淀物呈圆形,边缘整齐,轻轻振摇细菌分散呈均匀浑浊,此为阴性。然后从第1管起,逐管观察,如有凝集,可见管底有凝集块,边缘不整齐,液体澄清。“O”菌液的凝集呈致密颗粒状,不易摇散,“H”菌液的凝集呈疏松棉絮状,易摇散。
凝集强度的判断以“+”号表示如下:
“++++”:很强
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