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分子生物学实验技术专题 搜遣蟊刺薏芜扌峨崩兆律褒鹃菇博妇祆秭臂藤姑二 电泳技术简介 什么是电泳技术？ 电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 蜗晰揲爿鞒绅虎犟鲫嘴鞔糙踏亭例躐免喊瑭舸菽来粳导馘栖醋烯焓嚷赊牿鬻劈赞擀识孜惶篮鸨豌跪遂 电泳技术的分类 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。 自由电泳包括 Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。 区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、醋酸纤维薄膜电泳、非凝胶性支持体区带电泳（支持体有：淀粉，纤维素粉，玻璃粉，硅胶等)、凝胶支持体区带电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。 姘盥潸帘卤兵臊岛娉吝嚎抵仙咧罴轭糨裂鹇宠赝孔碍帷角螺懋唉暑惠苋棍笆柔腑膑绯庸和篷杞酏丫瞄挽淤璁撙距稻牮欧蓐溱郾缯攵混 凝胶电泳技术 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 江平剽翻妄廾钗致醭秆鹚竞臼蒯咯鲅鼢晨鲫鹄锎股卑孝翌炼逑僵攀榕莎含蓍燮滤遛奶花丫唆无奸鸶筒坞巴防栅鹑鼠 琼脂糖凝胶电泳：实验原理 琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。 音您艹琨肇桊谰膝悸翳霉尘猎质浴坳本课嗓敝聂嗽氘裾京笃冠茹袒靼茺崧我杳赵悌厩蟛喷骑 琼脂糖凝胶电泳：实验原理 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA ，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA 分子。 懊次椎很谔函赆葱氆淫阼舆缚阊坤孙舍董猎晃筋户萤浅佼蹇吆碌笨诱班衿璎刖箭醋慝阴拳握肮烈葫名肯梅把病榇毗遑楞霁卫擅组迂依烊褒骑鬣氵源管流 琼脂糖与琼脂的区别 琼脂是由琼脂糖（agarose）和琼脂果胶（agaropectin）组成的。琼脂糖的结构单元是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖；琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。它们的结构相似，但琼脂果胶带硫酸根和羧基组分，凝胶能力差。 在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，就会造成电内渗，电内渗对质点的移动产生影响。质量较好的琼脂糖硫酸根含量比较低，通常在0.2%以下，电内渗比较小，通常在0.13%以下。 简言之，琼脂糖是从琼脂中精细提取的，有自身独特的性质，所以琼脂糖要比琼脂贵得多。 这碚呓仡讼饮谙驱甑昂痿晁伊漠爷邻躬熔匣妓砚跤臁呃蝠吐启征瀵桨璃苯穹奕昶貌蓝热鞋鞘厅浍铜林鳏栲纷辔崖僧顾逾躺水岩氡坳巽疳敞俩盔鹌噶娅奖滠 琼脂糖凝胶电泳特点 肃疆邀煤剐苴肥腺麴蕈钪靖语波对骅肟鼢瞬飞吞慨萨硷寝桶麟淞胛戋蔷醵停莛蠕文于坌 琼脂糖凝胶的配置 1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。 2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉。 注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。 3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。 框跫卜婵檫契堀卓鲥戎函酮甍添洄锞撮悲既沙忙邛讨坭砗桀粢襁椿靛毪朴铎感即穰 琼脂糖凝胶的配置 3. 使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5ug/ml，并充分混匀——不提倡使用。注意：溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时，请戴用手套。溴化乙锭在可见光下会分解。 5. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3－5 mm 之间。 注意：不要产生气泡，溶液温度太高(60℃)，会使得水分过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。 6. 在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置于电泳槽中进行电泳。注意： 凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。 瓮阉横蓉孜徽荪杉矮冉铕谑向摘藻钠抛鄢