生物化学14 DNA的生物合成.ppt

她们为何如此相象？;复制;复制(replication) 是指使子代细胞得到和亲代相一致的遗传物质，DNA复制是以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。;第十四章;【目的要求】;执考大纲要求的知识点;本章主要内容：;DNA复制的基本特征 Basic Rules of DNA Replication;半保留复制(semi-conservative replication) 双向复制(bidirectional replication) 半不连续复制(semi-discontinuous replication) ;一、 DNA以半保留方式进行复制;A G G T A C T G C C A C T G G;子链继承母链遗传信息的几种可能方式:; ——实验结果支持半保留复制的设想。;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;原核生物基因组是环状DNA，只有一个复制起点（origin）。复制从起点开始，向两个方向进行解链，进行的是单点起始双向复制。;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。从一个DNA复制起点起始的DNA复制区称为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 ;5’;;DNA复制的酶学和拓扑学变化;参与DNA复制的物质:;复制的基本化学反应是生成磷酸二酯键;聚合反应的特点:;一、DNA聚合酶催化脱氧核苷酸间的聚合;5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |;（一）原核生物有3种DNA聚合酶;原核生物的DNA聚合酶;２个核心酶 1个?-复合物（?、?、??、?、?、? 6种亚基） 1对?-亚基（可滑动的DNA夹子）;功能：;323个氨基酸;DNA-pol Ⅱ（120kD）;;二、DNA聚合酶的碱基选择和校对功能实现复制的保真性;遵守严格的碱基配对规律； 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 复制出错时有即时校对功能。; 1.严格遵守碱基配对规律； DNA聚合酶的高度专一性（严格遵循碱基配对原则，但错配率为7 ?10-6 ）;复制保真性的酶学机制： 2、DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读 （二）复制的保真性依赖DNA-pol对碱基的正确选择;三、复制中的解链伴有DNA 分子拓扑学变化;（一）多种酶参与DNA解链和稳定单链状态;1、解旋酶 (helicase);DNA正超螺旋与负超螺旋;解链过程中正超螺旋的形成; 切割DNA双链，此时不需ATP；尔后由ATP供能，使DNA分子成负超螺旋再连接切口。 ; 3、单链结合蛋白 (single-strand binding protein, SSB);5′;HO;DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。;;原核生物DNA复制过程 The Process of DNA Replication in Prokaryotes;起始是复制中较为复杂的环节，在此过程中，各种酶和蛋白因子在复制起始点处装配引发体，形成复制叉并合成RNA引物。 ;E.coli复制起始点 oriC;;;;引发体和复制叉的生成 ;二、DNA链的延长; 5;领头链的合成：;; 在复制叉同时合成前导链和后随链;复制过程简图;原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。;5?;真核生物DNA生物合成过程 The Process of DNA Biosynthesis in eukaryotes;真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等； DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶?/?转换； 切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAse HⅠ和FEN1等。 ;哺乳动物的细胞周期;真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ;DNA-pol δ和pol α分别兼有解螺旋酶和引物酶活性。在复制叉及引物生成后，DNA-pol δ通过PCNA的协同作用，逐步取代pol α，在RNA引物的3?-OH基础上连续合成领头链。随从链引物也由pol