Western blot 实验技术 RUI SI 四医大-2.pdfVIP

加滤纸可防 漏液 加电泳液，内液加满，外液40cm 拔梳子要 均匀用力 左右同起 缓慢向上拔出 加样经验：不要吸进气泡， 对光加样，枪头插至加样孔 先顶后下滑 中一半的位置 慢－快－慢，边加边退 重要的样品后加 外液中冲洗枪头 样品一般在1.0mm厚的胶加样50-100ug/lane 在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免 边缘效应。 电泳：上层胶90V下层胶120V （仅供参考），用溴酚兰（10 －12KDa），或Prestain Marker 做指示。时间不宜太长， 如时间较长，可选择冰浴。 注意正负极 不要插反 清水冲洗胶板，小心取出胶 考染4h/过夜－－脱色液2h/过夜 转膜 湿转 将凝胶和固相基质夹在滤纸中间， 浸泡在转移装置的缓冲液中 系统复杂 时间长 半干转 将凝胶和固相基质象三明治一样加在用缓冲