《环境工程微生物学》实验.pdf

《环境工程微生物学》实验 安徽理工大学 环境科学与工程实验教学中心编 2007.9 目 录 目 录 实验一 显微镜的使用及细菌的简单染色 实验二 放线菌、霉菌的形态观察 实验三 微生物的显微直接计数 实验四 细菌的革兰氏染色法 实验五 培养基的制备及灭菌 实验六 微生物的接种技术 实验七 水中细菌总数的检测 实验八 水中大肠菌群(Coliform group) 的检测 实验一 显微镜的使用及细菌的简单染色 实验一 显微镜的使用及细菌的简单染色 一、目的要求 一、目的要求 1、学习细菌染色的原理和方法； 2 、掌握无菌操作技术，巩固油镜的使用方 法。 3 、学习细菌染色的原理和方法。 二、基本原理 二、基本原理 由于细菌的细胞小，菌体透明，肉眼无法看到的微 小生命体。我们可以借助显微镜来进行观察。显微镜 的种类很多，但基本构造可分为两大部分 ：一是机械 装置，二是光学系统。 细菌的简单染色就是根据细菌对不同染料的亲和力 不同，采用单一的一种染料，对细菌的涂片进行染色 的方法，从而能借助显微镜更清楚的观察到其形态结 构。 三、材料与器材 三、材料与器材 1、菌种 培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis ），或者 金黄色葡萄球菌 2、染色液和试剂 二甲苯、香柏油、吕氏碱性美兰、蒸馏水 3 、器材 普通光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、废液缸、 洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯等。 四、操作步骤 四、操作步骤 （一）显微镜的使用 （二）细菌简单染色 （一）显微镜的使用 1．观察前的准备 （1）置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约3-4c m, 镜检者姿势要端正，左眼观察，右眼便于绘图或记录。 （2 ）调节光源、光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较 弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。 2．低倍镜观察 （1）低倍镜旋到镜筒下方，旋转粗调节器,镜头 与载物台相距0.5cm。 （2）打开聚光器，使之与载物台同样高度。 （3）左眼看目镜，观察光源强弱，使全视野内 均匀明亮。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光 器，旋转反光镜调节光线。 3．高倍镜观察 （1 ）将高倍镜转至正下方，在转换物镜 时，需用眼睛在侧面观察，避免镜头与 玻片相撞。 （2 ）如果低倍镜重调对，换高倍镜时基本 可以看到目的物，若有点模糊，用细调 节器调就清晰可见。 （3 ）找到最适宜观察的部位后，将此部位 移至视野中心，准备用油镜观察。 4．油镜观察 （1 ）用粗调节器将镜筒提起约2㎝，将油 镜转至正下方。 （2 ）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏 油，切勿加多。 （3 ）从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心 地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头 几乎与标本相接，应注意不能压在标本 上。 （4 ）从接目镜观察，调亮光线，再用粗调节器将镜 筒徐徐上升，直至视野出现为止，然后用细调节器校 正焦距。如油镜已离开油面而仍未见物像，必须重复 操作至物像看清为止。 （5 ）观察完毕，关闭电源，上旋镜筒。用擦镜纸和 二甲苯清洁镜头。 （6 ）将各部分还原，将接物镜转成八字形，再向下 旋，降下同时把聚光镜。 （二）简单染色 （1）涂片 取干净载玻片一块，中央加一滴蒸馏 水，按无菌操作法，从枯草杆菌斜面上 挑取少量菌种，在载波片上和水混合， 涂成一均匀的薄层。涂片操作如下图： （2 ）晾干 让