中山大学生命科学学院 2011级 生物技术学 期末复习概要.pdf

中山大学生命科学学院 2011 级 生物技术学 期末复习概要 第一章  基因工程发展大事记： 1. 20 世纪20-40 年代：一些酶提纯结晶 2. 1902 年Emil Fisher：蛋白质结构是多肽 3. 40 年代末：Sanger 分析肽链N 端氨基酸 4. 1944 年O.T.Avery ： 肺炎球菌转化实验 5. 1949-1952 年S.Furbery 等X-射线衍射分析-DNA 是螺旋结构 6. 1953 年Watson 和Crick：DNA 双螺旋模型 7. 1956 年A.Kornberg ：DNA 聚合酶 8. 1972 年Paul Berg：第一个体外重组DNA 9. 1977 年W Gilbert 和F Sanger ，快速DNA 测序法建立 10. 1988 年PCR 问世 11. 1900 年J Watson 人类基因组计划 第二章  典型的基因结构： 1 中山大学生命科学学院 2011 级 生物技术学 期末复习概要 对于真核生物，编码区还含有内含子，在转录后加工除去。  基因表达调控概述 在原核生物中，常涉及到操纵子参与基因的表达调控。同时，基因的表达具有阶 段性。真核生物的基因表达不通过操纵子调控，使用增强子或者衰减子参与调控等。 基因表达除了具有阶段性以外，还具有组织特异性。 第三章 基因工程的基本技术  核酸的制取技术  DNA 提取：细胞破碎→核酸蛋白分开→RNA、DNA 分开→DNA 纯化 细菌为例：10% SDS，20mg/ml proteinase K→苯酚（phenol）/氯仿（chloroform ） /异丙醇→RNase→70%乙醇3M 醋酸钠pH5.2→ （保存）Tris/EDTA （TE ）buffer，- 20℃  基因组DNA 的片段化 机械切割法：超声波、高速搅拌 限制性内切酶→部分酶切Sau 3AI/BamHI  DNA 片段的部分分离  离心  蔗糖密度梯度离心：  氯化铯密度梯度离心：氯化铯在离心场中自行调节形成浓度梯度，并保持稳 定。当管底介质的密度大于粒子的密度时，粒子上浮；在弯顶处则粒子沉 降，最后粒子进入到一个它本身密度一致的区域。样品粒子的位置仅同样品 粒子的密度有关。离心管顶部的密度为1.65，底部为1.75，DNA 为1.70 （密 度单位）故DNA 在中部，RNA 密度＞1.8 在底部。  凝胶电泳：（核酸）核酸为多聚阴离子，电泳时向正极移动，相同数量双链DNA 具有等量的净电荷，故泳动距离仅仅与分子量和核酸的构型相关。  琼脂糖凝胶电泳：  惰性介质、高聚合强度、低电内渗  分辨率：0.2-50kb  浓度：0.8%-1.0%常用  缓冲液：TBE/TAE  最低检测量：1-2ng  应用：核酸分离，质粒构型、核酸纯度、浓度、相对分子量测定  聚丙烯酰胺凝胶电泳：  20%浓度可鉴定1bp 2 中山大学生命科学学院 2011 级 生物技术学 期末复习概要  分辨率：1-1000bp  染色方法→EB、Si