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石蜡切片paraffin section 制备 —苏木精-伊红对染法 实验原理石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 实验用品（一） 器材 切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。 （二） 试剂 卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。 试剂配法： 1、卡诺氏固定液： 100%酒精3份 冰醋酸 1份 或：100%酒精6份 氯仿 3份 冰醋酸 1份 2、埃利希苏木精染液的配法： 苏木精 1g 纯酒精 50ml 冰醋酸 5 ml 甘油 50 ml 钾矾（硫酸铝钾）约5g（饱和量） 蒸馏水 50 ml 配法： 、将苏木精溶于约15 ml的纯酒精中，再加冰醋酸后搅拌。 、当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的酒精。 、将钾矾在研钵中研碎并加热，然后将它溶解于水中。 、将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。 、此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方，并经常摇动以促进它的成熟。成熟时间约3~4周。若加入0.2g碘酸钠，可立刻成熟。此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期贮备无妨。此液可分别与伊红等进行二重染色。 3、1%伊红酒精溶液： 伊红1g溶于100 ml95%酒精溶液。 4、1%盐酸乙醇液 盐酸 1份 70%酒精 100份 5、甘油蛋白贴片剂： 蛋白 50 ml 甘油 50 ml 水杨酸钠（防腐剂） 1g 配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。最后加入防腐剂（水杨酸钠）作防腐用。可保存几个月。 （三） 材料 鼠肝 实验程序1、取材 颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或小肠）。切取的组织块不宜太大，以便固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2~3mm厚。取材的注意事项：（1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 （2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 2、固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入卡诺固定液中固定，固定30~50min。 固定的注意事项： （1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。 （2）有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。 （3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1~2次新液。（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。 1、 洗涤 材料经固定后，除乙醇外，组织中的固定液必须冲洗干净，尤其是含有重金属的固定液。因为残留在组织中的固定液，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察。冲洗方法根据固定液的性质而定，固定液为水溶液的常用水洗涤，固定液含有乙醇的则用50%~70%乙醇冲洗。 2、 脱水 30%、50%、70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水各40min，放入95%、100%各两次，每次20min。各种材料经固定与洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分除去。 脱水注意事项 （1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。 （2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。 （3）在低浓度或纯酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。 （4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。 （5）如需过夜，应停留在70%酒精中。 （6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象 5、透明 纯酒精、二甲