基因工程菌发酵过程中地不稳定性研究.PDFVIP

深 圳 职 业 技 术 学 院 学 报 2002 年第 3 期 Journal of Shenzhen Polytechnic No.3, 2002 基因工程菌发酵过程中的不稳定性研究 黄志立 （深圳职业技术学院 生物应用工程系，广东深圳 518055） 摘 要: 从基因工程菌 （细胞 ）的生长动力学模型入手，阐述了导致基因工程菌不稳定的 原因及不稳定性的表现；探讨了防止或降低基因工程菌不稳定性的对策，包括组建合适载体、 选择适当宿主、施加选择压力、控制基因过量表达及控制培养条件等。 关键词：基因工程菌；不稳定性；影响因素 中图分类号：Q784/Q785 文献标识码: A 文章编号: 1672-0318(2002)03-0023-06 基因工程是在生物体外对 DNA 分子进行重组结合，然后克隆到适合的宿主细胞，进 行增殖和表达的遗传操作，所得重组体菌株即是工程菌。1972 年，Berg 等人成功地把病毒 SV40 与大肠杆菌的l噬菌体 DNA 实现了重组。第 2 年，Cohen 把外源基因克隆到大肠杆 [1] 菌内并实现了表达，在世界上首次生产出基因工程产物 。目前基因工程已发展为当代生 物技术的核心，是国际生物工程最热门的研究领域之一。随着基因重组技术的进展，基因 工程菌株的培养技术也越来越受到重视。目前基因工程所采用的宿主细胞原核的有大肠杆 [2] 菌和枯草杆菌，真核细胞有酵母和哺乳动物细胞等，生产上多以大肠杆菌为主 。 采用基因重组技术构建的基因工程菌或细胞，由于含有带外源基因的重组载体，因而 对其进行培养与发酵的工艺技术与通常采用单纯的微生物细胞的工艺技术有许多不同之 处，基因工程菌 （细胞）培养与发酵的目的是希望其外源基因能够高水平表达，以便获得 大量的外源基因产物。而外源目的基因的高水平表达，不仅涉及宿主、载体和克隆基因三 者之间的相互关系，而且与其所处的环境条件密切相关。研究发现，工程菌在保存及发酵 生产过程中表现出不稳定性，该问题的解决已成为基因工程的高技术成果能否转变为生产 [3] 力的关键因素之一 。 1 基因工程菌 （细胞 ）的不稳定性 1.1 基因工程菌 （细胞）的生长动力学模型 [4] 以对数生长期为例，处于该时期的微生物生长的数学模型如下 ： dX / dt = mX （1） 其中：X 为细胞数量；t 为培养时间； m 为比生长速率。 假设在一定时间内含质粒细胞 （X + ）丢失质粒变为缺质粒细胞 （X - ）的机率为p ， 收稿日期：2002-07-09 作者简介：黄志立 （1974-），女，四川兴文人，博士，主要从事微生物学及分子生物学领域的研究工作。 23 Ｎ个X + 将会产生 N ·p 个X - 和 N •（1－p ）个X + ，则X + 与X - 细胞指数生长的表达式 [5] 为 ： + + + dX / dt = (1-p )m X （2 ） - + + - - dX / dt = p m X + m X （3 ） 式 （2 ）和 （3 ）成立的前提是