地图鱼迟钝爱德华氏菌病病原菌的鉴定及毒力基因的检测.pdfVIP

第22卷第6期 大连水产学院学报 VoL22N仉6 FISHERIES 2007年12月 JOURNALOFDALIAN UNIVERSITY Dee．2007 地图鱼迟钝爱德华氏菌病病原菌的鉴定 及毒力基因的检测 赵 飞， 邹为民， 谭爱萍， 罗 理， 姜 兰， 陆小萏 (中国水产科学研究院珠江水产研究所广东省水产动物免疫技术重点实验室，广东广州510380) 摘要：从患病地图鱼Astronotus oceUatus肝脏组织中分离到菌株A01，经人工感染试验证实其为致病菌。通 过ATBExpression半自动细菌鉴定仪和常规生理生化特性的分析，初步鉴定该菌株为迟钝爱德华氏菌Ed- wards／tarda。测定菌株A01的16SrRNA基因序列并进行分析，结果显示。该菌株与迟钝爱德华氏菌的 同源性最高，达99．9％。因此，可鉴定该菌株为迟钝爱德华氏菌。根据迟钝爱德华氏菌的毒力基因菌毛亚 基(EⅡ认)基因序列设计引物，进行PCR扩增，得到383bp序列，该序列与迟钝爱德华氏菌的fimA基因 序列相似性达99．O％，进一步说明菌株h01具有fimA基因，有一定的致病力。药物敏感试验结果表明， 菌株A01对阿米卡星、氧氟沙星、庆大霉素、新生霉素、氨苄西林、氨曲南、卡那霉素、头孢咪啉、诺氟 沙星、环丙沙星、呋喃妥因、妥布霉素、氨苄青霉素13种抗生素较为敏感。 关键词：地图鱼；迟钝爱德华氏菌；16SrRNA基因；flmA基因 中图分类号：S941．42 文献标识码：A 地图鱼Astronotusocellatus又名猪仔鱼、星丽笔者从患病地图鱼的肝脏组织中分离到一株有 鱼、黑猪鱼，隶属于鲈形目Perciformes、丽鱼科致病力的迟钝爱德华氏菌，并对该菌株的主要生物 Cichlidae、背丽鱼属Astronotus，原产于南美洲亚马学性状、16SrRNA基因序列与系统发育等方面进 逊河流域的委内瑞拉、巴西、圭亚那等地。其体长 行了研究，且对毒力基因fimA基因进行了克隆和 可达35cm，形态别致，体色艳丽，而且肉味鲜 序列测定，以期为了解迟钝爱德华氏菌的致病性并 美，营养丰富，是一种集观赏和食用为一体的大型 控制其传播和流行，以及对该菌的快速检测、人畜 名贵鱼类。随着现代集约化高密度养殖规模的扩 共患病的研究和防治提供参考。 大，地图鱼的病害较为严重，而国内学者对观赏鱼 1材料与方法 的病害研究较少。因此，加强对观赏鱼的病害研究 具有重要的意义。 1．1材料 迟钝爱德华氏菌Edwardsiellatarda是一种条件 致病菌，能严重危害淡、海水养殖鱼类u。2J。此 患病地图鱼取自广州市某观赏鱼养殖场，健康 catesbei- 外，还可感染两栖类(如牛蛙Rana 地图鱼购自广州市花鸟虫鱼市场，体重为(8．5± arla[31)、爬行类(如中华鳖TrionyxsinensisHl)、0．6)g。将地图鱼置于水族箱中暂养，以曝气的自 来水为水源，水温为(28-t-O．5)℃，待鱼适应环 鸟类(如冠企鹅Rockhopperpenguins口1)等。更为 重要的是，迟钝爱德华氏菌还是一种重要的人畜共 境并确认无疾病症状后，开始试验。 患病的病原菌，可引发人的肠胃炎MJ、肌坏死¨1、 细菌微量生化管购自杭州天和微生物试剂有限 菌血症【。】、细菌性关节炎一】等。fimA基因又名菌 公司，细菌基因组DNA提取试剂盒、多功能DNA 毛亚基基因，参与细菌对寄主细胞的侵袭，是迟钝 纯化回收试