分子诊断技术与临床.pdf

2015-05-27 分子诊断技术与临床 孙成铭 刘日明 烟台毓璜顶医院检验科 2011 2012 2013 2014 2015.5.17 2015-05-27 分子诊断的概念 分子诊断技术检测目的 采用分子生物学方法（基因扩增、测序、杂交、蛋白 质组学和代谢组学分析等）检测患者体内特定遗传物 质的结构或表达水平的变化而做出的诊断。分子诊断 的材料包括DNA、RNA、蛋白质和小分子。 疾病诊断及分型 治疗及预后判断 风险预测 2015-05-27 2015-05-27 PCR技术介绍及临床应用 测序技术介绍及临床应用 PCR技术介绍及临床应用 芯片技术介绍及临床应用 质谱技术介绍及临床应用 1 2015-05-27 一、PCR技术介绍 常见的PCR方法： PCR (Polymease chain reaction) 聚合酶链式反应 RT‐PCR 免疫PCR 用一对寡聚DNA作为引物，通过变性 巢式PCR -退火-延伸这一周期多次循环，使 实时荧光PCR （临床最常用） 目的DNA得到扩增。 原位PCR 膜结合PCR 不对称PCR 这一扩增是以指数形式积累的，经 梯度PCR等30多种 6 25-30个循环后，扩增倍数可达10 。 实时荧光定量PCR 二、实时荧光定量PCR临床应用 1996年，美国Applied Biosystems公司首先推出实时荧光定 （一）在传染性疾病检测中的应用 量PCR技术。 实时荧光定量PCR 是指在PCR反应体系中加入荧光基团， （二）抗肿瘤药物相关基因检测 利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准 曲线对未知模板进行定量分析的方法。