人胰岛素样生长因子I基因的人工半合成和克隆.pdfVIP

。 第 甍 人胰岛素样生长因子I基因的人工半合成和克隆 √ 乞 刘宝英 赵 明 王会信 丁红梅 王 芳 赵 强 f f ， … 军事医学科学院基础医学研究所 北京 100850 段7 【摘要】 利用固相亚磷酸三酯法化学合成了人胰岛素样生长因子 I(IGF—I)结构基因的4条寡 棱苷酸片段 ，然后通过 1、2和 3、4片段末端互补配对和Klenow酶促补平成为完整的IGF—I双链 DNA片段，通过适当的酶切后，克隆于pUC19中，构建了pUCIGF克隆载体。经双脱氧末端终止 法测序证明，DNA序列与我们所设计的IGF序列完全一致 关键词 堕垒查 皇兰旦王 ；垄旦；脱氧核糖棱酸塑· ； 测序 醒 中国图书资料分类法分类号 Q781 ThesemisynthesisofageneencodinghIGF—Ianditscloning LiuBaoying，ZhaoM ing，WangHuixin，DingHongmei，WangFang，ZhaoQiang InstituteofBasicMedicalSciences，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Beijing100850 Abstract Fourpng。nucle0tidesweresynthesizedaccordingtohuman insulinlikegrowthfactor 1DNA sequencebymeansofthesolidphasephosph0triestermethod．Twopairsofoligos1and 2，3and 4hadrespectivelybeenannealedbytheir15basecomplementarity．andthenpolymer izedintotwointactdouble—strandedgene+Thetwogenesweretheninsertedintoaplasmidvector pUC19afterappropriatecleavagewithrestrictionendonuclease．Theresultantreeombinam plas— midpUCIGFwassequencedby dideoxychain—terminationmethod，confirmingthatthesequence wasidenticalwhhwhichweanticipated Keywords insulin—likegrowthfactor T；gene；DNA ·recombinant；DNA sequencing 胰岛素样生长因子 I(insulin—likegrowthfac— 采用化学方法半合成了人 IGF—I基因 torT．IGF一1)是一类多功能细胞增殖调控因子， 1 材料和方法 主要由肝脏合成，大部分存在于血液中“IGF I的 生物学功能可以通过 自分泌、旁分泌、内分泌等方式 1．1 材料 起作用 ，它在神经损伤、糖尿病、生长迟滞、骨质疏 1．1．1 菌株及载体 E．cotiRRI、DH5a、JM109， 松等疾病的治疗中具有广阔的应用前景。，国外用 克隆载体pUC一19均为本室保存。 IGF I治疗肌萎缩侧索性神经炎疾病，已经进入 1．1．2 酶及主要生化试剂 限制性内切酶 EcoR I、11期临床 。但是血浆中IGF—I含量很低(1 I、BamH I、XbaI和 T4DNA 连接酶购 自New mg／100L血浆)，靠纯化天然 IGF—I根本不能满足 EnglandBiolabs公 司；PvuⅡ、DNA聚合酶大片段 基础研究和临床应用，因此通过重组DNA技术生 Klenow购 自Promega公司}DNA序列分析试剂盒 产IGF I是大势所趋。IGF—IcDNA共有210个核 T7DNASequence 为Pharmacia公司的产