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二维电泳蛋白的制备
双向电泳样本制备;一、蛋白质提取原则：
二、样本裂解方式：
三、2D蛋白裂解液组成及作用：
1：裂解液组成及作用
2：常见裂解液
四、蛋白质提取步骤：
五、蛋白质样本制备实例：
1：动物组织样本制备
2：植物组织样本制备
六、样本制备试剂：;1: 蛋白质制备主要目的：
(1)：细胞，组织的破碎裂解
(2)：蛋白质溶解以及破坏蛋白质和蛋白质分子之间，蛋白质与
非蛋白质之间的共价与非共价相互作用;破碎的方法;破碎方法; 组成;1、变性剂：
(1) 作用：改变或破坏氢键等次级键的结构，使蛋白质的肽链伸展
开来，充分暴露疏水中心。
(2) 分类：脲，硫脲，或两者的混合物可以增加蛋白质的溶解性，特
别是膜蛋白。必须避免将含有尿素的溶液加热到30度以上，
因为这样会使其水解为氰酸盐，修饰蛋白质，改变蛋白??的
电荷。
;2、去垢剂：
(1) 作用：破坏蛋白质分子间的疏水相互作用。
(2) 种类：
a: 非离子去垢剂：triton X-100, NP-40
b: 两性离子去垢剂：
CHAPS,CHAPSO
SB3-10(不溶于浓度高于5mol/L的脲中）
ASB(具有比CHAPS更强的膜蛋白溶解力）
c: 阴离子去垢剂：SDS（小于0.25%，同时确保其他去垢剂和SDS的比例至少为8：1）
;3、还原剂：
(1) 作用：断裂蛋白质中的二硫键，以利于肽链的分离。
(2) 分类: β-巯基乙醇，二硫苏糖醇（DTT）,二硫赤藓糖（DTE）
a: 其中DTT带有电荷，在等点聚焦时，常常会迁移到PH范围 以外，从而使某些蛋白质的二硫键重新配对，使溶解度降低而重新沉淀下来。使用浓度范围10~100 mmol/L.
b: 采用非离子还原剂三丁基膦TBP可以大大增加蛋白质的溶解性，并利于蛋白从第一向转移到第二向。但是TBP在水溶液中的不稳定性和不溶性，使其在第一向IEF中维持蛋白质还原状态是相对无效的。因此在IEF时建议最好使用巯基还原剂。
;种类; 1、 提取前准备：
（1）: 提取总蛋白，亚细胞蛋白；
（2）: 裂解细胞的方式选择；
（3）: 裂解液的选择。
2、 加入裂解液，冰上放置一段时间。
3、 离心去沉淀，收集上清蛋白。
4、 用于二维电泳时，考虑是否有必要除去干扰物质，如核酸，
脂类，盐等。;五、双向电泳样本制备实例——动物样本;五、双向电泳样本制备实例——植物样本;五、双向电泳样本制备实例：;六、双向电泳样本制备试剂; 辉骏生物：/ 免费服务热线：400-699-1663
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