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p16及survivin蛋白在食管癌中表达及意义 　 作者：宋长山，谭家驹，赵建亭，刘晓萍 【摘要】 ［目的］ 探讨食管癌中p16与survivin蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。［方法］采用EnVision免疫组化法检测62例食管癌及其相应癌旁正常黏膜组织的p16与survivin蛋白的表达。［结果］ 癌旁正常黏膜中的p16与survivin蛋白的阳性表达率分别为91.9%和6.45%，而相应癌组织分别为32.3%和72.6%。两组间均有显著性差异（Plt;0.01）。食管癌中p16表达的缺失与组织学分级、临床分期和淋巴转移有关（Plt;0.05）。而survivin蛋白阳性表达则与淋巴转移有关（Plt;0.05），而与组织学分级、临床分期无关（Pgt;0.05）。p16与survivin蛋白在食管癌中的表达呈负相关(r=-0.495，Plt;0.01)。［结论］ p16表达的缺失与survivin蛋白的过度表达与食管癌的发生、进展和淋巴结转移密切相关，两者联合检测有助于食管癌病情的评估和预后判断。 【关键词】 食管肿瘤 食管癌的发生和发展与癌基因的激活、抑癌基因的失表达、细胞的凋亡失衡等有关。p16基因是第一个被证明为参与细胞周期调控机制的抑癌基因，其编码生成的16kD的p16蛋白是细胞增殖的负调节物[1]。Survivin基因是凋亡抑制基因的新成员，高表达于多种肿瘤组织和转化细胞，与肿瘤的发生发展及预后相关[2]。我们运用免疫组织化学方法检测p16与survivin蛋白在62例食管癌中的表达情况，分析其与相关临床病理参数的关系。 1 材料与方法 1.1 一般资料 本组62例，男性45例，女性17例，年龄46～70岁，中位年龄59.2岁。术前均未经过放疗和化疗，手术切除后病理证实为鳞状细胞癌。高、中、低分化者分别为18例、23例、21例。TNM分期为Ⅱ期25例、Ⅲ期25例、Ⅳ期12例。病理证实有淋巴结转移者43例，无淋巴结转移者19例。癌旁正常黏膜组织均超过癌肿边缘5cm。 1.2 试剂与方法 鼠抗人多克隆抗体p16和兔抗人survivin多克隆抗体购自福建迈新生物技术公司，EnVision试剂盒为DAKO公司产品(购自上海基因公司)。EnVision免疫组化法步骤如下：①石蜡切片脱蜡至水；②切片经修复热处理放入Citrate缓冲液(0.01mol/L，pH6.0)，微波煮沸10min；③经蒸馏水洗后，入3%过氧化氢5min；④蒸馏水冲洗后，再经TBS缓冲液冲洗，一抗温育30min；⑤经TBS缓冲液冲洗后，多聚物二抗EnVision温育30min；⑥TBS缓冲液冲洗后，DAB显色，镜下控制；⑦经蒸馏水冲洗后，苏木素复染、脱水、透明、封固。TBS代替一抗作阴性对照，选取已知阳性表达的组织作阳性对照。 1.3 结果判断 p16表达以胞核或胞核和胞浆出现粗细不等、深浅不一的棕黄色颗粒为阳性，而只见胞浆阳性表现为非特异性染色。Survivin表达的阳性信号为胞浆内或胞核内出现浅黄色微细颗粒～棕黄色颗粒。根据阳细胞百分比分5个等级：阳性细胞数lt;5%为0；5%～25%为1分；26%～50%为2分；51%～5%为3分；gt;75%为4分。染色强度分为：0分为无色；1分为淡黄色；2分为棕色；3分为棕褐色。总分计算方法为：阳性细胞数分值乘以染色强度所得分值的乘积。总分0～1分为阴性(-)；2～5分为轻度阳性(+)；6～8分为中度阳性(++)；9～12分为重度阳性(+++)。 1.4 统计处理 采用SPSS11.0统计软件对数据进行χ2检验和精确概率法。 2 结 果 2.1 p16与survivin蛋白在食管癌组织中的表达 62例食管癌旁正常黏膜组织中p16和survivin的阳性表达率分别为91.9%和6.45%，而相应癌组织分别为32.3%和72.6%。两者在两组间表达差异有显著性（Plt;0.05）。见表1。 高、中、低分化组p16阳性表达率分别为55.6%、26.1%、19.1%。p16的表达率随着恶性程度的增高而降低，高分化组p16表达明显高于中、低分化组(Ｐlt;0.05)；而survivin在高、中、低分化组的阳性表达率分别为66.7%、73.9%和76.2%，各组间的表达差异无显著性（Pgt;0.05）。 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期p16的阳性表达率分别为52%、20%、16.7%。Ⅱ期组p16表达明显高于Ⅲ、Ⅳ期(Ｐlt;0.05)。而survivin在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期组的阳性表达率分别为60.0%、80.8%和81.8%（Pgt;0.05）。 淋巴结是否转移患者中p16的阳性表达率分别为20.1%和57.9%，两组间有显著性差异（Plt;0.01）。Survivin在淋巴结是否转移患者中分别为81.