藤黄菌素对人白血病细胞系HL60体外增殖影响.docVIP

藤黄菌素对人白血病细胞系HL60体外增殖影响 　 作者：陈伟珠，林小聪，刘新光 【关键词】 藤黄菌素；白血病细胞系；增殖；细胞周期 　　［摘要］目的：观察藤黄菌素对HL60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法：分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术，在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果：应用台盘蓝拒染法，藤黄菌素能够显著地抑制HL60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明：藤黄菌素作用2 h可使HL60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论：藤黄菌素能够明显抑制HL60细胞体外增殖。 　　［关键词］ 藤黄菌素；白血病细胞系；增殖；细胞周期 　　Effect of Luteolin on Proliferation of Human Leukemic Cell HL60 in Vitro 　　Abstract:Objective To observed the influence of luteolin on proliferation and cell cycle of human leukemic cell HL60 in vitro.Methods The cell growth was tested by trypan blue stain assay and the cell cycle was analysed by flow cytometry in the various conditions.Results Using the trypan blue stain assay we found that luteolin inhibited the proliferation of HL60 cell strongly,the higher dose and/or the longer time,the more obvious effects.Flow cytometry analysis showed that luteolin could arrest cell cycle progression in G2/M and G0/G1 phase in two hours,respectively.Conclusion luteolin is an effective flavonoid compound which can notably inhibit the proliferation and cell cycle of HL60 cell in vitro. 　　Key words:Luteolin;Leukemic cell;Proliferation;Cell cycle 　　藤黄菌素（结构式见图1）是从龙胆科植物湿生蕾中所提取的一种黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学和药学作用［1,2］。许多研究表明藤黄菌素对多种肿瘤细胞均有抑制作用，如乳腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等［1,3,4］。为此，本实验选用藤黄菌素研究其对HL60细胞体外增殖及细胞周期的影响，为进一步探讨黄酮类化合物在体内的抗癌作用机制提供实验依据。藤黄菌素（3’,4’,5,7四羟基黄酮） 　　1材料与方法 　　1．1　材料 　　1．1．1　试剂　　 　　藤黄菌素为Sigma公司产品，纯度99%。RPMI1640培养基为Gibco公司产品。超级新生牛血清购自杭州四季青公司。二甲基亚砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF) 为Amresco公司产品。十二烷基硫酸钠(SDS)为Biomol公司生产。四噻唑蓝(MTT)为Sigma公司产品。其他所用试剂均为国产分析纯试剂。 　　1．1．2　仪器　　 　　美国Precision公司生产的La5410型CO2孵箱，美国BioRad公司生产的450型酶标免疫测定仪,美国Coulter公司生产的EpicsX2型流式细胞仪。 　　1．1．3　细胞系　　 　　人早幼粒细胞白血病HL60细胞系购自中国科学院上海细胞生物所。 　　1．2　方法 　　1．2．1　细胞培养　　 　　人早幼粒细胞白血病HL60细胞系培养于含有10%灭活的超级新生牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基中，37 ℃、5% CO2饱和湿度孵箱中孵育。 　　1．2．2　台盘蓝拒染法检测细胞增殖　　 　　取对数生长期的HL60细胞，调整细胞浓度为1.0×105/ml～2.0×105/ml，直接加入24孔板，每孔1 ml，用药组加入1 μl不同浓度的药物，每组设3个平行孔，并设对照孔。细胞加药后置于37 ℃、5% CO2饱和湿度孵箱中孵育，然后按1∶10（V/V）加入0.4%的台盘蓝，染色2 min～3 min，在光学