第二章 噬菌体展示技术1.pdf

一、噬菌体展示技术 第二章、噬菌体展示技术 原理 Phage Display 基因型 表达型 融合蛋白 PIII Lead Hv Link Lv E PIII M13噬菌体颗粒 4 、生活史： • 通过性毛感染雄性（F+或Hfr ）大肠杆菌，或 • M13 particle: 通过转染进入雌性大肠杆菌细胞； • 进入细胞后，转变成复制型 (RF) dsDNA，然 后以滚环方式复制出ssDNA 。 • 每当复制出单位长度正链，即被切出和环 化，并被立即组装成子代噬菌体和以出芽方 式（即宿主细胞不被裂解）被释放至胞外。 1 M13 life cycle • 性菌毛与Ⅲ作用，衣壳脱去，病毒DNA侵入细菌。 • +DNA转变成双链环状DNA ，RFDNA 。Ecoli pol合 成-DNA 。然后进行数轮θ复制。 • 滚环复制： – Ⅱ在RFDNA(+)链的特定位置切割，产生切口，然后 Ecoli polI 以-链DNA为模板，在+链DNA 的3’OH端延 伸，合成+链DNA 。复制叉移动到终点时，Ⅱ切割产生 一个单位长度的噬菌体基因组DNA ，然后环化，再转化 为RFDNA 。作为下一轮复制+DNA和转录的模板。 • 当RFDNA达到100～200拷贝，SSB （ Ⅴ ）抑制Ⅱ 的翻译，并与新合成的+DNA 结合，阻止转化为 RFDNA ，也不再合成病毒DNA 。 • 包装：形态发生和分泌以协同方式进行。 单链DNA 的产生 • Producing single-stranded recombinant DNA using M13 and phagemid vectors. • (A) M13 vectors. M13 vectors are replicative (RF) forms of M13 derivatives containing a nonfunctional component of the lacZ b-galactosidase system which can be complemented in function by the presence of a complementary lacZ