绿色荧光蛋白标记的枯草芽胞杆菌r31在西芹根际定殖研究.pdf

中国农学通报 2014,30(9):237-241 Chinese Agricultural Science Bulletin 绿色荧光蛋白标记的枯草芽胞杆菌R31 在西芹根际定殖研究 陈燕红，黎永坚，喻国辉，陈远凤 （珠海市农业科学研究中心，广东珠海519070） 摘 要：为了更直观地了解植物内生枯草芽胞杆菌R31 在西芹根际定殖情况，评估其定殖能力，为西芹黄 萎病生物防治提供依据。通过原生质体转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒pHT315-gfp 导入枯草 芽胞杆菌R31 细胞中，对菌株进行gfp 标记，然后利用gfp 标记菌株灌根处理西芹苗，研究其在西芹根际 的定殖形式和能力。结果获得了携带pHT315-gfp 质粒的R31-gfp 菌株，该质粒可以在R31 细胞中稳定 表达，标记菌R31-gfp 在蓝光激发下可以稳定发出强的绿色荧光。利用标记菌接种西芹幼苗后，可以在 根系表皮检测到绿色荧光膜。对其定殖量的检测发现，接种3 天后标记菌在根表和根际土中稳定定殖， 4 4 定殖量分别达到1.4×10 cfu/g 和7.6×10 cfu/g ，并长期以该水平稳定定殖，到第65 天仍可在根表和根际 4 5 土检测到9.1×10 cfu/g 和3.17×10 cfu/g 的R31-gfp 。由此得出，R31 可以在西芹根表形成菌膜，并在根际 长期稳定定殖。 关键词：枯草芽胞杆菌；绿色荧光标记；西芹根际；定殖 中图分类号：S432 ，S182 文献标志码：A 论文编号：2013-1713 ColonizationofGreenFluorescentProteinGeneTaggedBacillussubtilisR31inCeleryRhizosphere ChenYanhong,LiYongjian,YuGuohui,ChenYuanfeng (ZhuhaiAgricultureResearchCenter,ZhuhaiGuangdong519070) Abstract: Inordertostudythecolonizationof Bacillus subtilis R31 inceleryrhizosphere,toassessits colonizationabilityandprovidebasistocelerywiltbiocontrol.PlasmidpHT315-gfp wasintroducedintocells of Bacillus subtilis R31 byprotoplastsconversionand gfp-taggedR31 wasacquired, gfp-taggedR31 was irrigatedaroundtheceleryroottostudyitscolonizationstyleandability.Resultsshowedtherecombined plasmidwasstablein gfp-taggedR31 cells.TheR31-gfp cellscouldemitbrightgreenfluorescenceunder bluelightstably.GreenfluorescentfilmonthesurfaceoftheceleryrootinoculatedR31-gfp couldbeobserved underfluorescentmicroscopy.ItwasfoundthatR31-gfp cellscouldcolonizeinceleryrhizospherequickly. Threedaysafterinoculation,cellsonthesurfaceofceleryrootsandintheso