多潜能干细胞应用于男性不育症的研究与前景.docVIP

　　多潜能干细胞应用于男性不育症的研究与前景 　　精子携带遗传信息，并在父代与子代之间进行传递。精子发生初始，原始生殖细胞 （ primordialgerm cells,PGCs） 从起源的尿囊基底部移行到生殖脊。在原始性腺定植之后，PGCs 经历 DNA 去甲基化、染色体修饰及亲代印迹的消除等过程。进入青春期之后，男性原始生殖细胞经过完整的减数分裂过程，形成有功能的成熟精子。在精子发生的过程中，任何一个环节的错误均有可能导致男性不育或者其他病理情况的发生。然而，人类精子发生的分子机制仍存在大量未解之谜，一部分原因是由于无法在体外模拟人类精子发生的早期阶段。因此，体外精子发生模型的建立将促进我们深入了解精子发生过程，进而更好地理解不育症的发病机制，有助于男性不育症的临床治疗。 　　国内外研究人员尝试利用多种类型的干细胞来体外诱导精子发生，包括精原干细胞（ spermatagonialstem cells,SSCs） 、间充质干细胞（ mesenchymal stemcells,MSCs ） 、胚胎干细胞 （ embryonic stem cells,ESCs） ,以及新近出现的诱导多潜能干细胞（ inducedpluripotent stem cells,iPSCs） .其中，SSCs 与 MSCs均属于成体干细胞，是存在于已分化组织中的未分化细胞，常定位于特定的微环境中[1].SSCs 是精子发生的基础，在尽可能模拟生精微环境的条件下，SSCs 比其他类型的干细胞更易诱导精子形成，但是SSCs 的分离纯化较为复杂，且对于自身缺乏 SSCs的不育患者，这一方案也无法实施。MSCs 广泛存在于多种组织中，易于体外扩增，常用的 MSCs 多于脐带与骨髓组织[2].然而，研究表明 MSCs 在向精子诱导分化的过程中，可以增强减数分裂相关基因的表达，但是较难跨越减数分裂的瓶颈，可能与自身的分化潜能有关[3].ESCs 是一种高度未分化的细胞，具有发育全能性，且已经实现体外诱导为具有生物活性的精子，但是人 ESCs 的制备面临伦理争议，因而相关研究受到了一定程度的限制。 　　iPSCs 的出现成功避免了 ESCs 研究的相关争议。个体特异的 iPSCs 不会引起免疫排斥反应，且与供体细胞具有完全相同的遗传信息，更为重要的是 iPSCs 的建立不需要卵细胞，也无需破坏胚胎发育，避免了伦理上的限制。因此，国内外研究者们不断在寻求诱导 iPSCs 向生殖细胞分化的方法。 　　本文将对 iPSCs 在精子发生过程中的相关研究进行综述，并探讨 iPSCs 应用于男性不育症临床治疗所面临的问题以及发展前景。 　　1 ESCs 诱导精子发生的研究现状 　　近年来，ESCs 诱导精子发生已经在诸多物种中进行探索，并取得了巨大的研究进展，尤其是小鼠和人 ESCs 体外向生殖细胞分化的大量研究。国外多个研究小组通过拟胚体（ embryoid body,EB） 形成，并经过 BMP4 （ bone morphogeic pro-tein4,BMP4） 或 RA（ retinoic acid,RA） 诱导可使小鼠 ESCs 分化为各阶段雄性生殖细胞。Geijsen 等[4]证实了小鼠 ESCs 的单倍体细胞可以使卵子受精。Nayernia 等[5]更进一步利用小鼠 ESCs 的雄性生殖细胞获得了存活的后代，但是存活下来的子代小鼠体型均比对照组大或小，且不能存活超过6 个月，测序结果也表明实验获得的配子并没有完全清除祖父代的甲基化印记，研究人员认为扰乱的雄性生殖细胞特异性甲基化印记是后代表型异常和成熟前死亡的原因。因此，更多的研究需要探索ESCs 的生殖细胞与正常的生殖细胞之间甲基化印记的差异及发生机制。Hayashi 等[6]利用贴壁细胞两步分化法，通过一系列细胞因子的作用也使小鼠 ESCs 分化获得了原始生殖细胞样细胞（ PGC-like cells,PGCLCs） ,PGCLCs 的精子不仅可以使卵子受精，而且产生了存活的后代。 　　相比之下，人 ESCs（ hESCs） 诱导精子发生的研究相对比较受限。研究表明，hESCs 的 EBs 可以自发向雄性生殖细胞分化，表达多种生殖细胞及单倍体细胞的分子标志物，包括 VASA、BOL、SCP1以及 SCP3 等[7].Chen 等[8]也发现 hESCs 自发向生殖细胞分化。然而，这些研究都阐明这种自发的分化效率非常低且不完全。单层细胞分化法、EB 分化法、新生性腺组织共培养法等均被用来研究hESCs 向 PGCs 的分化，但是诸多的研究均没有跨越减数分裂的瓶颈。通过过表达与精子发生相关的家族基因（ DAZL、DAZ 及 BOULE） ,Kee 等[9]实现了减数分裂并获得了单倍体细胞。一些研究小组在避免基因修