分子荧光的分析-N.pptVIP

* 第三章 分子荧光分析法Chapter 3 Molecular Fluorescence 第一节 概述 一、分子荧光分析法 利用物质分子的荧光进行分析测定的方法 第一节 概述 一、分子荧光分析法 利用物质分子的荧光进行分析测定的方法 化合物分子吸收电磁波并发射出另一波长电磁波 二、分子荧光与荧光量子效(产)率 1. 分子荧光 2. 荧光量子效(产)率 荧光分子发射与吸收的光量子数之比 lex、I0 lem、If 定性 定量 激发光 发射光 第一节 概述 一、分子荧光分析法 二、分子荧光与荧光量子效(产)率 利用物质分子的荧光进行分析测定的方法 三、溶液的荧光强度 荧光定量分析基本关系式 荧光溶液的吸光度≤0.05 该关系式是如何得来的？ 若 第一节 概述 一、分子荧光分析法 二、分子荧光与荧光量子效(产)率 利用物质分子的荧光进行分析测定的方法 三、溶液的荧光强度 荧光定量分析基本关系式 荧光溶液的吸光度≤0.05 四、溶液荧光的猝灭 荧光物质分子其它物质分子相互作用引起荧光强度降低的现象 荧光猝灭法 第二节 荧光光谱仪 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 I0 透射光 检测器 信号显示系统 F It 狭缝 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 1. 光源 为荧光测定提供足够强度的、稳定的激发光 氙灯、高压汞灯、激光器 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 1. 光源 氙灯、高压汞灯、激光器 2. 激发单色器 将光源发出的复合光分解为单色光 干涉滤光片、光栅 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 1. 光源 氙灯、高压汞灯、激光器 2. 激发单色器 干涉滤光片、光栅 熔融石英 盛放试样的容器 不吸光、无荧光、四壁透明 3. 吸收池 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 1. 光源 氙灯、高压汞灯、激光器 2. 激发单色器 干涉滤光片、光栅 熔融石英 四壁透明 3. 吸收池 将荧光物质产生的荧光分解为单色光 4. 发射单色器 光栅 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 1. 光源 氙灯、高压汞灯、激光器 2. 激发单色器 干涉滤光片、光栅 熔融石英 四壁透明 3. 吸收池 4. 发射单色器 光栅 将荧光信号转换为电学信号 光电管、光电倍增管、CCD、二极管阵列、光子计数器 5. 检测器 灵敏度高 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 三、激发光选择与激发光谱 激发光谱：荧光强度与激发光波长间的关系曲线。 激发光波长： 最大激发波长 lex 与紫外吸收光谱一致 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第二节 荧光光谱仪 一、荧光光谱仪的基本结构 二、荧光光谱仪的主要部件 三、激发光选择与激发光谱 最大激发波长 lex 四、发射光选择与发射光谱 发射光谱：荧光强度与发射光波长间的关系曲线。 与激发光波长无关 发射光波长： 最大发射波长 lem Stokes位移 镜像规则 发射光单色器 样品池 激发光单色器 光源 检测器 第三节 分子荧光分析法的应用 二、荧光定性分析 很少采用 利用荧光激发和发射光谱实现 三、荧光定量分析 标准曲线法 与紫外-可见分光光度法相同 标准对比法 A≤0.05 定量依据 定量方法 一、荧光分析法的特点 1. 灵敏度高(1~100ppb) 暗背景下测量 2. 选择性好 3. 提供的物理参数较多 4. 方法简便、试样用量少 第四节 分子荧光的产生 一、分子发光与分子荧光 激发能量 激发 定性 l I 样品 样品 发射 定量 生物发光 化学发光 荧光、磷光 分子发光 生物能 化学能 电磁波 激发能量 分子发光分析的特点 灵敏度高、选择性好 光致发光 化合物分子吸收能量从基态电子能级跃迁至激发态，若其返回基态时释放出电磁辐射，则产生分子发光。 第四节 分子荧光的产生 一、分子发光与分子荧光 二、荧光和磷光的产生 1. 分子的激发 基态 激发态 激发 单重态 激发 三重态 第四节 分子荧光的产生 一、分子发光与分子荧光 二、荧光和磷光的产生 激发单重态、激发三重态 1. 分子的激发 2. 激发态分子的去活化 a. 振动驰豫 激发 单重态 激发 三重态 激发态分子将过