.枸杞多糖对高糖环境肾小球系膜细胞.doc

枸杞多糖对高糖环境肾小球系膜细胞 1、相关定义 1.1、细胞凋亡概念及过程 细胞凋亡的发生机理是细胞通过启动自身内部调控基因来维持其内 环境稳态的过程。它存在两种形式:生理性凋亡和病理性凋亡,前者是有 益的,表现在正常机体维持结构和功能稳定的诸多方面,它可以清除体内 无功能的、受损的、突变的或有害的细胞,保证细胞的数量和质量从而维 持细胞内环境稳态,它还可以导致感染的细胞死亡,起到防御作用;后者 会造成细胞数量大大减少,组织器官受损甚至死亡,可发生在各种疾病中, 如肿瘤和神经退行性疾病等。凋亡细胞有三种主要的形态特征,即核固缩、 核裂解和凋亡小体。 细胞凋亡过程在形态学上可分为三个阶段:凋亡的起始:形态学方面 的变化主要表现为细胞表面的特化结构如微绒毛的消失,细胞间接触的消 失,但细胞膜还未被破坏仍然完整,未失去选择通透性;细胞质中,线粒 体大体完整,但核糖体逐渐从粗面内质网上脱落,内质网逐渐与质膜融合; 3 染色体固缩后沿着核膜分布。凋亡小体的形成:核染色质断裂后与特定 细胞器如线粒体聚集在一起,并被反折的细胞膜所包围。从外观上看,细 胞表面产生了许多泡状突起,然后逐渐分隔形成单个的凋亡小体。凋亡 小体逐渐被邻近的细胞吞噬并消化。从细胞凋亡开始,到凋亡小体的出现 才持续数分钟,而整个凋亡过程有可能延续数小时[21]。 1.2、畸胎瘤和胚胎癌的概念 畸胎瘤的研究起始于对畸胎瘤(Teratomas)和畸胎癌(Teratocarcinomas)发生机 制的研究。两者均是生殖系内的常见肿瘤,偶发于生殖腺外部。畸胎瘤是良性生殖细 胞瘤,畸胎癌则是一种具有较低自发率的恶性瘤组织,由着床前胚胎或来自于胚胎囊 4 浙江理工大学硕士学位论文 胚胎干细胞在肝脏微环境下成瘤性的研究 胚内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)的胚胎性细胞转移到宫外部位而形成的。这 2 类 细胞均含有三个胚层的成体组织或器官,似乎是胚胎组织无序分化的结果。 Conheim[24]基于对这 2 种肿瘤的病理学研究提出”胚巢理论”:有少量存在于成体 器官中的胚胎性组织,一般处于静息状态,但是若所处微环境变化,这些残存的胚胎 组织会重新开始增殖,但由于缺失相关的调控,只能产生大量类似胚胎组织的细胞而 不能发育成完整的个体。 与之类似的是,Pierce[25]提出的”胚胎癌细胞”(Embryonal Carcinoma Cells,ECCs)。 ECCs 来自原始生殖细胞或多能性胚胎干细胞在胚胎发育早期的恶性成分,具有多能性, 恶性程度也较高。结合现在流行的肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)理论,这类细 胞通常以 CSCs 的一个(在胚胎发育期的)亚型作为研究肿瘤来源和恶化的良好模型[26, 27]。 以上 3 种概念十分接近,胚胎干细胞在体内成的瘤通常称为 Teratomas,故本文以 畸胎瘤(Teratomas)代表这 3 个概念,指代来自胚胎性组织的恶性瘤组织,其分离得 到的细胞兼具肿瘤恶性和多能性,为胚胎癌细胞(EC)。 1.3、单克隆抗体的概念及特性 4.2.1 单克隆抗体的基本概念和原理 抗体主要由 B 淋巴细胞合成,每个 B 淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动 物脾脏的 B 淋巴细胞系有上百万种之多,每一种不同的 B 淋巴细胞由于含有不同的 基因,可以合成不同的抗体。当抗原刺激机体时,抗原分子上的许多决定簇分别激活 各个具有不同基因的 B 淋巴细胞分裂增殖成许多遗传物质一样的细胞,这就是克隆。 由许多个被激活 B 淋巴细胞的分裂增殖形成多克隆,合成分泌多种抗体。如果想要得 到一种单一的抗体,就需要从众多 B 淋巴细胞中选出能够合成分泌所需抗体的一个细 胞进行培养,就可得到由单个细胞分裂增殖形成的细胞群,即单克隆。单克隆细胞只 能合成分泌抗某一种决定簇的抗体,称为单克隆抗体。 制备单克隆抗体首先要获得能合成专一抗体但不能再体外声场的单克隆 B 淋巴 细胞,然后利用骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖的特性,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细 胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一,得到了继承两种亲代细胞特性的杂种骨髓瘤细 胞,既能够合成专一抗体,也能在体外不断培养增殖,这种杂交瘤细胞分泌的抗体就 是抗某一抗原决定簇的特异单克隆抗体。 4.2.2 单克隆抗体的主要特点 与多克隆抗体相比,单克隆抗体具有以下三个显著特点: (1)高度均质性:单克隆抗体是由起始于一个 B 淋巴细胞的单克隆系所分泌的,因此 它的每个抗体分子的氨基酸结构都相同,具有高度的均质性。 (2)高度特异性:单克隆抗体只专一与抗原分子上特异的抗原决定簇发生反应,一般 10 不与其他决定簇发生交叉反应。 (3)来源稳定,可大量生产:当得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株后,可在液