骨骼肌卫星细胞的形态学观察.docVIP

2 结果 2.1 骨骼肌卫星细胞的形态学观察 原代取材的骨骼肌卫星细胞18 h即完全贴壁，呈梭形或长条形，见图1。接种第3天进入对数生长期，第7天长至80%融合。 传代后的细胞6 h即完全贴壁，细胞增殖速度明显加快，生长较原代细胞更为旺盛。 Figure 1 Figure 1 Adherent growth of skeletal muscle satellite cells（×10） 图1 贴壁生长的骨骼肌卫星细胞（×10） 2.2 骨骼肌卫星细胞免疫细胞化学染色鉴定结果 在骨骼肌卫星细胞胞浆内可见棕黄色沉着，骨骼肌肌动蛋白呈阳性表达，肌动蛋白免疫细胞化学染色阳性率为95%，见图2。作为对照的成纤维细胞为阴性反应。 Figure 2 Immunocytochemical identification of Figure 2 Immunocytochemical identification of the third passage of skeletal muscle satellite cells (×20) 图2 第3代骨骼肌卫星细胞免疫细胞化学染色鉴定(×20) 2.3 促红细胞生成素受体免疫细胞化学染色结果 在骨骼肌卫星细胞胞浆内可见棕黄色沉着，促红细胞生成素受体呈阳性表达，见图3。 Figure 3 Immunocytochemical identification of Figure 3 Immunocytochemical identification of erythropoietin receptor (×10) 图3 促红细胞生成素受体免疫细胞化学染色结果(×10) 2.4 促红细胞生成素对骨骼肌卫星细胞分化能力的影响 在使用不含胎牛血清和促红细胞生成素的DMEM培养基培养至第5天，局部相邻的骨骼肌卫星细胞可以互相融合成长条状的肌管，排列与骨骼肌卫星细胞的生长方向一致，见图4。 Figure 4 Formation of myotubes Figure 4 Formation of myotubes after 5 days of culture without erythropoietin (×20) 图4 未加入促红细胞生成素的骨骼肌卫星细胞培养5 d形成肌管(×20) 随着时间的推移，肌管逐渐增多，至第10天形成大量的肌管，且能看见肌管的跳动。加入含10，20，40 u/mL促红细胞生成素培养基的骨骼肌卫星细胞则未见肌管的形成，细胞大量堆积在一起，出现不同程度的细胞老化现象，表现为胞浆内出现不规则的颗粒，而且有大量细胞死亡，见图5。 Figure 5 Figure 5 Skeletal muscle satellite cells cultured with erythropoietin accumulated without myotube (×10) 图5 加入促红细胞生成素的骨骼肌卫星细胞未见肌管形成，堆积在一起(×10) 2.5 细胞活力MTT检测结果 与未加入促红细胞生成素组比较，作用24 h时10，20，40 u/mL促红细胞生成素组骨骼肌卫星细胞活力无明显变化（P 0.05）；作用 48 h，72 h时，各组吸光度值均明显升高（P 0.05），且呈一定的浓度依赖性，见表1。 表1 表1 MTT法检测促红细胞生成素对骨骼肌卫星细胞活力的影响 Table 1 MTT determination of the effect of erythropoietin on skeletal muscle satellite cells (±s，n=4，A) Erythropoietin Erythropoietin (u/mL) 24 h 48 h 72 h 0 0.373 9±0.050 2 0.405 3±0.100 8 0.488 0±0.063 6 10 0.374 5±0.042 9 0.418 7±0.136 0 a 0.552 4±0.075 6 a 20 0.374 8±0.052 5 0.426 1±0.068 2 a 0.577 3±0.059 5 a 40 0.376 4±0.044 0 0.427 8±0.078 1a 0.591 2±0.042 4 a aP aP 0.05，vs. the 0 u/mL erythropoietin group Figure 3 Double immunohistochemistry staining of Figure 3 Double immunohistochemistry st