生物大分子结构与功能复习题.pdf

《生物大分子结构与功能》复习重点整理 第一部分 核酸化学 1.运用基因工程的方法，现在科学家们已经可以在大肠杆菌中表达具有特定医学 用途的蛋白质，如胰岛素、生长激素等。假如你想在大肠杆菌中大量表达某一 人的基因产物，可能会面临哪些问题？ 大肠杆菌是原核系统，目标产物是哺乳动物真核细胞的产物。首先，目的基 因不能有内含子。 一要有合适的表达载体。①质粒能够好的复制转录②表达载体要有合适的功 能元件帮助cDNA 转录翻译，比如CMV 启动子，IRIS （核糖体进入位点）等③ 有抗性位点④能与宿主菌基因型匹配适合在合适的宿主菌中生长。⑤有tag 方便 产物的分离纯化。 二要有合适基因型的大肠杆菌。①要能大量增殖，稀释外源蛋白表达时的能 荷②转录，宿主与质粒基因型可匹配，有相应的转录辅助因子，比如 rosetta 菌 ③翻译，可以匹配人源的密码子偏好性④翻译后，能够对蛋白进行正确折叠，糖 基修饰，加肽 。⑤对固醇类或其他分子也要改造宿主基因型 使其核实表达。 三要有合适的诱导环境。 2.甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH ） 的序列是已知的，你用什么方法和技术可以确定其在染色体上的位置和大小？ （1）FISH 法。用已知的标记DAPI、PI 的单链核苷酸为探针，按照碱基互 补配对原则对待测材料中的单链核酸进行特异性结合，再用荧光显微镜示踪。 Step1 标本变性4%PFA + 探针变性 Step2 杂交—洗脱信号放大封片荧光镜检 （2 ）RFLP 法 Step1 片段用酶切碎 跑胶分离DNA 限制性片段Southern blot DNA 转膜 Step2 DNA 与加了标记的核酸探针杂交洗膜显影细胞图谱与物理图 谱，遗传图谱关联比对。 3.为什么人体细胞在进行有限的细胞分裂之后将停止分裂？若它们持续分裂将 发生什么？癌细胞为什么会持续分裂下去？ （1）理论一端粒学说 端粒是真核生物染色体末端由许多简单重复序列和相关蛋白组成的复合结 构，具有维持染色体结构完整性和解决其末端复制难题的作用。随着细胞不断分 裂，端粒的长度越来越短，当达到一个临界长度，细胞染色体即失去稳定性，阻 止细胞进一步分裂的信号便发出。细胞将发生凋亡（apoptosis ）。端粒的长度决 定细胞的寿命，因此可用失去的端粒数来“计数”细胞分裂的次数，端粒被形象 地称之为分子钟（molecular clock ）或有丝分裂钟（mitotic clock ）。 绝大多数恶性肿瘤细胞反常地重新出现端粒酶的活性，发挥其合成端粒的功 能，补尝正常的端粒丢失，端粒将不能达到临界长度。如此，这个细胞就不能进 入正常的老化和衰亡，从而获得了“永生性”（immortality ）。这样，一个恶性增 殖的肿瘤细胞克隆便宜告形成 （2 ）理论二细胞周期调控学说 不同细胞周期阶段的的长度是由内外部化学信号精确调控的细胞周期之间 的转换受“检测点”调控。Cyclin 和 cyclin 依赖激酶 CDK ，共同作用。肿瘤 细胞中，细胞周期检测点通常不受控制，这种不受控制是由于控制 cyclin/CDK 复合物浓度机制的遗传缺陷造成的。编码 cyclin/CDK 复合物的基因突变或，响 应蛋白突变导致癌症发生 4.人类基因组计划完成后，发现其中仅有 25000 种编码基因，约占 99%的序列 都是不编码的。有人说这些不编码序列是垃圾序列，你怎么理解这些非编码序 列？它们有功能吗？ 对于目前发现的“非编码序列”。有些是真的“非编码”，有些其实是编码一 些功能未知的短肽，但是常常被误认，现在成为新的研究热点。 5.研究发现人 miR-124 可能直接作用与 CDK4 而抑制膀胱癌的生长。请设计一 个实验，以证明上述假设是正确的。 （1）通过生物信息学手段查找 mirRBASE 数据库找到mir124 的种子序列及 在CDK 3 ’UTR 的靶位点。 （2 ）设计引物用PCR 法从基因组DNA 中克隆所需的CDK 3 ’UTR ，将此 片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-