类产品抑菌效力检查方法.doc

检查内容及步骤 菌种确认 品名 标准编号 数量（支） 菌种代数 来源 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 黑曲霉 确认人及日期： 复核人及日期： 培养基确认 品名 批号 用途 来源 胰酪胨大豆肉汤培养基 胰酪胨大豆琼脂培养基 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 接种白色念珠菌 沙氏葡萄糖琼脂培养基 黑曲霉 确认人及日期： 复核人及日期： 6.3培养条件确认 6.3.1本检查法中细菌、控制菌的培养温度为 ℃，真菌的培养温度为 ℃。 6.3.2培养箱确认 序号 培养箱名称 型号 校验日期 校验周期 校验单位 1 电热恒温培养箱 HH.B11.500-S 2 生化培养箱 LRH-150B 确认人及日期： 复核人及日期： 6.4样品来源确认 品名 批号 数量 来源 备注 蛋白琥珀酸铁口服溶液 确认人及日期： 复核人及日期： 6.5操作环境确认 为 的洁净区域以内，局部（操作台）为 级并单向流空气。 确认人及日期： 复核人及日期： 7 培养基的适用性检查 7.1抑菌剂效力测定用培养基应进行培养基的适用性检查，包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。 7.2菌种 试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 铜绿假单胞菌 （Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC(B)10 104〕 大肠埃希菌 （Escherichia coli） 〔CMCC(B) 44 102〕 金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus）〔CMCC(B)26 003〕 白色念珠菌 （Candida albicans） 〔CMCC(F) 98 001〕 黑曲霉 （Aspergillus niger） 〔CMCC(F) 98 003〕 7.3菌液制备 7.3.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。 7.3.2菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 7.3.3菌液浓度确认 品名 稀释倍数 平皿计数 结论 皿1（cfu/ml） 皿2（cfu/ml） 平均值（cfu/ml） 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 白色念珠菌 黑曲霉 7.4适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 7.5结果判定 若被检培养基上的菌落平均数不少于对照培养基上菌数平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查