转基因植物检测技术的研究进展-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（２）：１２０１２６ 转基因植物检测技术的研究进展 郭　斌　祁　洋　尉亚辉 （西北大学生命科学学院　西安　７１００６９） 摘要　现代植物基因工程使转基因植物及其产品越来越多地进入人们的生活，转基因植物安全 性在世界范围内引起了广泛关注，对转基因植物检测技术的需求也越来越紧迫。就转基因植物 检测技术的研究进展进行综述，重点介绍以基因和蛋白为目标的检测技术，包括ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ和基 因芯片技术的最新进展，并对不同方法的优缺点进行对比。此外，提出对特定代谢产物的检测是 转基因植物检测的重要组成部分，是以后检测技术的发展趋势之一。最后，以差异蛋白为检测目 标，结合研究工作提出基于双向电泳技术的转基因植物检测方法及其产品溯源方案。 关键词　转基因植物　检测技术　基因芯片　ＰＣＲ　双向电泳 中图分类号　Ｑ７８ 　　现代生物技术的发展为利用外源基因培育新种农 １．１　特定ＤＮＡ序列的检测技术 作物提供了途径。人们对转基因植物潜在的风险尚存 　　转基因技术的核心是对植物遗传物质进行人为改 疑问，转基因产品在研究、生产和销售的过程中，存在 造。因此检测改造过的遗传物质是转基因检测的最直接 多种扩散、污染的安全隐患，是目前转基因作物能否获 方法。被检测的特定ＤＮＡ序列包括两类：一类是非目的 准商品化生产的瓶颈所在。世界各国都在努力制定相 基因序列，包括：启动子序列（提供启动信号）、终止子序 应的法律和法规，以加强对进出口转基因植物及其产 列（提供基因表达的终止信号）以及克隆载体自身序列。 品的管理。转基因生物安全问题需要进行转基因生物 大部分转基因植物是通过含有烟草花叶菜花叶病毒 安全评价，而转基因生物检测技术是安全评价的关键 （ＣａＭＶ）、３５Ｓ启动子（Ｐ３５Ｓ）和／或ＣａＭＶ３５Ｓ（Ｔ３５Ｓ）或 之一［１］。因此，研究转基因动植物产品检测的关键技 农杆菌胭脂碱（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｎｏｐａｌｉｎｅ）合成 术，探索转基因生物计量和全程溯源技术，建立转基因 酶终止子（ＴＮｏｓ）的载体所转化的。常见的克隆载体有 生物安全检测技术体系，成为目前亟待解决的关键问 ｐＢＲ３２２质粒及其衍生物（例如 ｐＵＣ１９）。质粒常含有氨 题。本文详细介绍了国内转基因植物及其产品的检测 苄青霉素或新霉素／卡那霉素（ｎｐｔＩＩ）抗性基因以便于 技术，对其今后的发展进行讨论。 筛选，因此通过对Ｐ３５Ｓ、Ｔ３５Ｓ、ＴＮｏｓ、ｂｌａ或ｎｐｔＩＩ４种标 １　转基因植物检测技术 志物的鉴定来筛查外源基因的方法已得到广泛应用。但 是某些基因，如Ｔ３５Ｓ（或Ｔ３５Ｓ）序列在烟草花叶病毒中 　　对转基因植物产品的检测方法，目前主要有两类： ［２］ 天然存在 ，含有目标序列的农杆菌等多种细菌也存在 （１）以导入外源基因的特定ＤＮＡ序列为检测对象的检 于土壤中，因此，检测结果存在较高假阳性，只能作为初 测技术。（２）针对导入外源基因表达的蛋白质的鉴定 步的检测方法。另一类被检测的特定ＤＮＡ就是目的基 方法。近几年，发展对转基因植物特征代谢产物检测 因序列本身。检测可以对转基因产品进行定性鉴别，也 技术的研究成为热点。 可以对转基因成分进行定量分析。主要方法有：多重