蒙汉民族人群HLA-DQB1基因多态性及.pptVIP

蒙汉民族人群HLA-DQB1基因多态性与支气管哮喘关系的研究 专业 呼吸内科 导师 崔丽英教授 2006级研究生 年英 它的发病机制涉及了Th1/Th2细胞间的失衡，在外周血中及气道内可见大量CD4+T 细胞的激活[2]。而CD4+T 细胞的激活的关键步骤是抗原递呈细胞（Antigenic presentation cell,APC）膜表面的人类白细胞抗原HLAⅡ（Human Leukocyte Antigen Ⅱ）类分子将外源性的肽段递呈给T细胞受体（T-cell receptor,TCP）,参与免疫应答，HLAⅡ类分子起着“桥梁”作用[3]。 HLA基因是位于人的第六号染色体短臂(6P23.1)片段上紧密连锁的基因复合体,全长约3500Kb，根据各功能区的功能又将HLA系统分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ大类,即移植排斥调节基因、免疫应答调节基因和补体基因。现已证明不同的HLA等位基因及其产物在哮喘发病中起保护性作用或为哮喘的易感因素。 HLA-Ⅱ类基因在调节免疫应答中起重要作用, 并且具有高度的多态性,它包含HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP三个亚区，其中HLA-DQ亚基因与支气管哮喘发病关系密切[4],已被许多研究证实。迄今所建立的HLA的DNA分型技术对HLA-DQB1多态性的分析较为成熟,故我们将研究重点放在HLA-DQB1上,旨在探讨蒙汉民族人群支气管哮喘与HLA-DQB1的相关性。 关于HLA-DQB1等位基因的研究,国内外均见报道。国际HLA组织以家系为基础的研究证实了HLAⅡ类基因与尘螨诱导的哮喘间的关系。意大利人Mapp[5]研究显示，二异氰酸酯诱发的哮喘与HLA-DQB1*0503等位基因呈正相关，与DQB1*0501呈负相关。Balboni等[6]的研究也证实了这一点。Aron等[7]在欧洲白人的研究中发现哮喘患者DQB1*0502频率高于正常对照组。但Ribs等[8]的研究并没有发现DQ基因与哮喘有关。 国内学者的研究结果亦不尽相同。上海瑞金医院的郭雪君等[9]研究了32个家系共98例病人，提出HLA-DQB1*0303，*0601是哮喘的遗传易感等位基因。高金明[10]等的研究证明，哮喘患者中DQB1*O201等位基因与我国北方汉族哮喘易感性有关，而DQB1*0301基因与哮喘抗性有关。这些不同的研究结果可能与种族基因分布不同有关，也可能和检测方法不同有关。 目的和意义 用分子生物学的方法探讨HLA-DQB1位点基因在蒙汉民族人群的多态性和与支气管哮喘的相关性 ，从免疫遗传学角度探讨蒙汉民族支气管哮喘发病的遗传学特征，为今后支气管哮喘病因学研究及治疗学提供一定依据。 立题依据 可行性 （1）目前哮喘的发病率逐年增高，我区是蒙古族集中的地方，我院又是内蒙地区较大的综合医院，病源充足，并且我科成立了哮喘之家，与区内各所医院合作密切，有利于病例收集。 （2）我科对HLA-DQA1、β受体的基因多态性与支气管哮喘的关系的研究已经结束，论文已发表，对 DRB1的研究已做了前期预试验，目前已经收集了很多病例并积累了一定的经验有利于实验的完成。 （3）本实验的研究方法即PCR-SSP法具有简便、快速、结果易于检测等优点，所要求的设备在我校内蒙古医学院中心实验室均具备。 创新性 HLA-DQB1基因作为哮喘的侯选基因之一，其多态性与哮喘的相关性虽为国内外学者广泛研究，但是到目前为止少数民族支气管哮喘与HLA-DQB1等位基因关系的研究很少，蒙古族仍无研究，蒙古族是我国的主要少数民族之一，因此，从免疫遗传学角度研究蒙汉民族支气管哮喘患者遗传学的特征及其发病机制具有非常重要的临床意义。 材料与方法 研究对象： （1）祖籍三代居住在内蒙古地区无血缘关系、无异族通婚史，无高血压、糖尿病、免疫系统疾病、炎性肠病等与HLA相关疾病的蒙古族哮喘患者50例，汉族哮喘患者50例，健康汉族和健康蒙族各30例作为对照。 （2）诊断标准：收集病例均符合2002年11月中华医学会呼吸病学分会制定的哮喘诊断标准 （3）入选病例均为内蒙地区多所医院的门诊和住院患者。 （4）正常对照组为蒙汉族健康体检者。 实验材料 （1）主要仪器：超低温冰箱、低温低速离心机、台式高速离心机、PCR扩增仪、电子天平、恒压恒流电泳仪、微波炉、全自动凝胶成像系统、紫外透射检测仪等。 （2）主要试剂：DNA提取试剂盒、引物、PCR扩增所需试剂如T