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原核表达手册
pET System Manual
第 10版pET系统操作手册于2002年7月修订完成。Novagen一直致力于研制开发pET系统,并将 pET系统的新进展
编入本手册。欲获取 pET系统的任何最新资讯,请随时登录Novagen网站。
内容提要
内容提要 1
I. 系统介绍 4
A. 概况 4
B. 使用许可及协议 4
C. 系统组成 4
D. 选择合适的pET 载体 4
基本考虑因素 5
蛋白溶解性及细胞定位 5
融合标签 5
各种pET 载体特性列表 7
E. pET 载体克隆策略 8
制备不带融合标签的天然蛋白 8
制备以蛋白酶切去融合标签的天然蛋白 9
不需连接反应的克隆方法(LIC) 9
F. pET 系统蛋白表达的调控 10
T7lac 启动子 10
pLysS 和pLysE 宿主菌 10
载体与宿主菌共同影响表达水平 10
含葡萄糖的培养基 11
pLacI 宿主菌 11
pETcoco™ 系统 11
G. 用于克隆的宿主菌 11
H. 用于表达的宿主菌 12
蛋白酶缺陷型 12
调节培养体系中所有细胞的表达水平 12
二硫键的形成及增加蛋白可溶性 12
补充稀有密码子
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