蜂花粉提取物抗氧化作用研究.docVIP

蜂花粉提取物抗氧化作用的研究 厉 阗，曹 炜，宋纪蓉 （西北大学 化工学院，陕西 西安，710069） 摘要：为进一步开发利用蜂花粉资源，研究5种蜂花粉活性成分的抗氧化性。采用超声法，以甲醇为溶剂提取5种蜂花粉活性成分；测定提取的5种蜂花粉活性成分对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基的清除率和脂质过氧化的抑制率。结果表明：5种蜂花粉均具有较强的抗氧化作用，其中荞麦花粉甲醇提取物对超氧阴离子的清除作用和脂质过氧化的抑制能力最强；油菜花粉甲醇提取物对羟基自由基和二苯代苦味酰（DPPH）自由基的清除能力最强。认为蜂花粉是一种有前途的天然抗氧化剂。 关键词：蜂花粉；抗氧化作用；甲醇提取物 中图分类号：Q5　1000-274X(2004)0089-06 生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。现代医学研究证明，衰老、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系[1 ]。自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应，造成相关细胞结构与功能的破坏，其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损伤，使人体发生病变。在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情况下，如果不及时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化能力，人体就会加速衰老、易患疾病。天然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用，同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。因此，对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的天然抗氧化剂研究，己得到普遍关注[2]。 花粉是植物的雄性生殖细胞，它存在于雄蕊的花药之中。蜂花粉是蜜蜂采集花粉后用自己的唾液和花蜜粘合形成的颗粒，比单一花粉更有营养价值[3]。蜂花粉中含有黄酮类、维生素、激素、核酸、酶类和微量元素，具有特有的抗衰老作用，是良好的抗氧化食品。蜂花粉的种类不同，所含成分有很大区别，因此研究不同种类蜂花粉的抗氧化作用具有重要的价值。本文研究蜂花粉甲醇提取物对超氧阴离子、羟基自由基、DPPH自由基的清除与脂质过氧化的抑制作用，通过对比不同蜂花粉对氧自由基的清除率和脂质过氧化的抑制作用，为开发利用蜂花粉资源提供依据。 1 材料与方法 1.1 材 料 1.1.1 样品与试剂 油菜蜂花粉、荞麦蜂花粉、茶叶蜂花粉、芝麻蜂花粉、益母草蜂花粉由陕西老蜂农蜂业有限责任公司提供；二苯代苦味酰自由基( DPPH)为 Sigma公司产品，分析纯；甲醇、硫代巴比妥酸等均为国产分析纯试剂。 1.1.2 UV-751型紫外可见分光光度计，上海分析仪器总厂；KQ-250DB型数控超声波清洗器，昆山1.2 方 法 1.2.1 蜂花粉活性成分的超声萃取 称取干燥后的5种蜂花粉各2 g，分别用30 mL甲醇在常温下超声30 min，过滤滤渣再提取一次，合并滤液，弃去滤渣。将所得滤液用旋转蒸发器浓缩加甲醇定容至10 mL备用。 1.2.2 1）蜂花粉对超氧阴离子自由基的清除作用。采用超氧阴离子抑制率=[(△A自氧化–△A样品)/ △A自氧化] ×100% 2）蜂花粉对羟基自由基的清除作用[5，6]。在10 mL硬质试管中，依次加入KH2PO4-K2HPO4(PH7.4)缓冲液0.4 mL，一定量的样品液1.04 mmol/L EDTA-1mmol/L FeSO4-1 mmol/L Vc 0.1 mL），12 mmo H2O2 0.1 mL，60 mmol脱氧核糖(DR)0.05 mL，定容为1.0 mL。然后将试管置于37℃1 h，，1 mL 10% TCA(三氯乙酸)及1% TBA 1 mL,在100℃沸水中加热15min，取出，，532 nm处测吸光值。按下式计算清除率 抑制率={[A模型-(ADR-A样品)]/A样品}×100% A模型 模型管吸光度（不加样品），ADR 加入清除剂和DR后吸光度，A样品样品本身的吸光度（不加DR）。 3）DPPH自由基的清除作用[7]。2 mL 及2×10-4 mol/L DPPH溶液2 mL加入同一试管中，30 min后用溶剂作参比测定其吸光度Ａi ,2×10-4 mol/L DPPH 溶液与2 mL甲醇溶剂混合后的吸光度AC，以及蜂花粉提取液2 mL与2 mL溶剂混合后的吸光度Aj ，根据公式计算抑制率 抑制率=[1-(Ai-Aj)/AC]×100% 4）蜂花粉对脂质过氧化的抑制作用[8]。取0.2 m卵磷脂溶液，加入样品，加入50 μL FeSO4(347.5 mg FeSO435 mg Vc，定容至25 mL)溶液，加PBS缓冲液(pＨ＝7.4)定容至3 mL，37℃育温40 min，每5 min摇匀一次然后加入TCA和1%硫代巴比妥酸1 mL，摇匀，100℃水浴15 min，5 000 r/min离心10 min，于532 nm处测定吸光度，用蒸馏水空白。抑制率=[(A模型–