体外高通量评价过敏反应模型的建立及其对潜在过敏原异莲心碱的.PDF

2016 年11月第23卷第11期 中国中医药信息杂志 ·51· 体外高通量评价过敏反应模型的建立及其对潜在过敏原 异莲心碱的评价研究 1 1 1 1 2 2 1 2 王莉 ，刘青 ，王石峰 ，俞洋洋 ，孙圣楠 ，蒋俊 ，史新元 ，栗世铀 1.北京中医药大学中药学院，北京 100102 ；2. 中国科学院北京基因组研究所，北京 100101 摘要：目的 建立体外高通量评价过敏反应模型，并对中药单体化合物进行筛选，从而确定其中的潜在过 敏原。方法 建立稳定表达 MrgX2 的高通量药物筛选细胞模型。首先将重组质粒pmCherry-C1-MrgX2 转染人 胚肾 HEK293 细胞，通过 G418 筛选建立稳定表达人 MrgX2 的细胞株；再通过 MrgX2 特异性激动剂 C48/80 和拮抗剂 2-APB 检测细胞株的功能和稳定性，以 Z 因子确认高通量体系的稳定性和可靠性。采用上述模型对 180 个单体化合物进行筛选，以 EC50 、IC50 、特异性及毒性确定该激动剂的功能性。结果 MrgX2 细胞模型对 特异性激动剂 C48/80 和特异性拮抗剂 2-APB 的 EC50 和 IC50 分别为 2.7 µg/mL 和 46.29 µmol/L ，MrgX2 细胞模 型第 1 代和第 20 代对激动剂的反应基本一致，该模型 Z 因子为0.78。筛选得到异莲心碱为阳性激动剂，其功能 验证结果为：EC50 为 4.5 µmol/L 、IC50 为 39.47 µmol/L ，只能特异性激动MrgX2 受体，且无细胞毒性。结论 采 用钙流方法可成功构建基于过表达细胞系 HEK293/MrgX2 的体外高通量评价过敏反应模型，并且初步确定异 莲心碱为潜在引发过敏反应的过敏原。 关键词：MrgX2；过敏反应评价方法；高通量；钙流检测；异莲心碱 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.013 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2016)11-0051-06 Establishment of High-throughput Model for Anaphylactic Reaction in Vitro and Evaluation 1 1 1 1 of Potential Anaphylactogen Isoliensinine WANG Li , LIU Qing , WANG Shi-feng , YU Yang-yang , SUN Sheng-nan2 2 1 2 , JIANG Jun , SHI Xin-yuan , LI Shi-you (1. Department of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China; 2. Beijing Institute of Genomics, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, China) Abstract: Objective To establish a high-throughput evaluation model for anaphylactic reactions; To screen and identify po